人核因子κBp65核定位信号缺失突变对A549细胞恶性表型的影响
近期，首都医科大学附属北京安贞医院研究人员发表论文，旨在鉴定人核因子B（NF-B）p65核定位信号（NLS）缺失突变质粒即pcDNA3.1（+）-NF-Bp65NLS（简称NF-Bp65NLS）的表达功能，以及其对低表达NF-Bp65的A549细胞株即A549/NF-Bp65shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。研究指出，通过基因突变技术构建无NLS的NF-Bp65真核表达质粒，可明显增
近期，首都医科大学附属北京安贞医院研究人员发表论文，旨在鉴定人核因子κB（NF-κB）p65核定位信号（NLS）缺失突变质粒即pc DNA3.1（+）-NF-κBp65ΔNLS（简称NF-κBp65ΔNLS）的表达功能，以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。研究指出，通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒，可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平，并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内；同时，细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力，提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。该文发表在2015年第01期《中国呼吸与危重监护杂志》上。
培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株，分为对照组、转染pc DNA3.1（+）组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化；应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。
结果显示， 成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1（+）组比较，NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调（10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22，P<0.01），NF-κBp65蛋白表达水平明显升高（1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04，P<0.01），且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内，在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1（+）组比较，转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。
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