近期,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所卫生部激素与发育重点实验室研究人员发表论文,旨在构建miR-223敲减慢病毒,为进一步研究miR-223的功能提供工具。研究指出,成功构建了miR-223敲减慢病毒,为进一步研究miR-223的功能准备了条件。该文发表在2015年第07期《天津医药》杂志上。 采用Invitrogen公司miR-RNAi在线设计工具,根据miR-223成熟体序列设计
近期,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所卫生部激素与发育重点实验室研究人员发表论文,旨在构建mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能提供工具。研究指出,成功构建了mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能准备了条件。该文发表在2015年第07期《天津医药》杂志上。
采用Invitrogen公司mi R-RNAi在线设计工具,根据mi R-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R载体,经酶切连入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建了mi R-223敲减慢病毒质粒,利用293T细胞将其包装成病毒,并感染ST2细胞,观察感染效率并用q RT-PCR检测mi R-223成熟体表达。
酶切鉴定及测序结果显示成功构建了mi R-223敲减慢病毒载体,mi R-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞,表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%~90%,病毒滴度为1×109PFU/m L,感染效率达90%。感染mi R-223敲减慢病毒的细胞mi R-223表达量(0.31±0.03)低于阴性对照(1.00±0.09),为阴性对照的31%,差异有统计学意义(n=3,t=15.091,P<0.05)。
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