大鼠线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体的构建与鉴定
近期，成都医学院生物医学系研究人员发表论文，旨在构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体。研究指出，成功构建Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体，并获得Nix过表达与干扰细胞模型。该文发表在2015年第06期《成都医学院学报》杂志上。 PCR扩增获得Nix基因序列，与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病
近期，成都医学院生物医学系研究人员发表论文，旨在构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体。研究指出，成功构建Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体，并获得Nix过表达与干扰细胞模型。该文发表在2015年第06期《成都医学院学报》杂志上。
PCR扩增获得Nix基因序列，与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病毒载体；以Nix为靶基因，合成寡核苷酸，退火形成双链DNA，与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-U6-Scramble-Puro载体连接获得Nix shRNA重组慢病毒载体；将病毒包装辅助质粒与上述重组慢病毒载体共转染293T细胞，收集上清液并浓缩获得慢病毒浓缩液，3倍梯度稀释法测定病毒滴度；用病毒颗粒感染PC12细胞，经嘌呤酶素筛后得到稳定感染细胞株；荧光显微镜检测Nix荧光水平，Western blot检测Nix蛋白的表达。
成功构建Nix基因过表达和shRNA慢病毒载体，并在293T细胞中包装获得病毒。重组病毒感染PC12细胞后，荧光显微镜检测Nix基因过表达细胞荧光水平增加，shRNA感染细胞荧光水平降低；Western blot检测显示Nix基因过表达PC12细胞中Nix蛋白表达显著升高，shRNA慢病毒感染细胞中Nix蛋白表达明显降低，而Nix shRNA1干扰效果最好。
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