实时荧光定量PCR检测沙门菌flor基因和sul2基因方法的建立
作者：杨俊岭 整理 来源： 日期：2016-01-09
导读
近期，安徽农业大学动物科技学院安徽省畜禽产业共性研究院研究人员发表论文，旨在建立一种flor基因和sul2基因的SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法，为检测沙门菌的耐药性以及耐药基因分子流行病学调查奠定基础。研究指出，建立的检测沙门菌中flor基因和sul2基因的荧光定量PCR方法具有很好的灵敏性、特异性和重复性，可以广泛用于临床中flor和sul2两种基因的检测以及沙门菌耐药分子流行
近期，安徽农业大学动物科技学院安徽省畜禽产业共性研究院研究人员发表论文，旨在建立一种fl or基因和sul2基因的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法，为检测沙门菌的耐药性以及耐药基因分子流行病学调查奠定基础。研究指出，建立的检测沙门菌中fl or基因和sul2基因的荧光定量PCR方法具有很好的灵敏性、特异性和重复性，可以广泛用于临床中fl or和sul2两种基因的检测以及沙门菌耐药分子流行病学的调查。该文发表在2015年第07期《中国抗生素杂志》上。
以氟苯尼考、复方磺胺甲噁唑抗性的沙门菌菌株为材料，根据Gen Bank中登陆的沙门菌fl or和sul2基因序列，设计并合成引物，建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系，绘制出标准曲线并对其溶解曲线进行分析。
结果显示， 以pMD18-T为载体构建的标准品的Ct值与样品的浓度的对数在一定范围内呈现良好的线性关系，两基因的检测域值较小，fl or基因可以检测到102 copies/μL的样品，sul2基因可以检测到103 copies/μL的样品，经耐药性与基因表达量相关分析，耐药性较高的菌株其fl or基因、sul2基因表达量也较高。
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