慢病毒及脂质体法转染原代软骨细胞的实验研究® -网聚医学的力量

慢病毒及脂质体法转染原代软骨细胞的实验研究

作者：杨艳辉整理来源：日期：2015-12-02

导读

　　近期，贵州医科大学病理学教研室研究人员发表论文，旨在利用慢病毒载体及Lipofectamine 2000脂质体转染大鼠原代软骨细胞，探讨转染软骨细胞的理想条件。研究指出，当MOI为100时可作为转染软骨细胞安全有效的条件，这为细胞转染技术在软骨细胞的研究领域提供实验基础。该文发表在2015年第08期《贵州医药》杂志上。　　采用机械酶消化法获取原代软骨细胞，经Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后，使

　　采用机械—酶消化法获取原代软骨细胞，经Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后，使用慢病毒载体介导GFP及利用Lipofectamine 2000介导的FAM-siRNA分别转染原代软骨细胞，倒置荧光显微镜检测转染效率，MTT法测定原代软骨的增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率。

　　采用脂质法转染软骨细胞不理想，转染率不到10%。运用慢病毒载体后转染率明显高于脂质体法，且随感染复数（病毒滴度×病毒液体积/细胞数，MOI）增加而增加，MOI为100时，转染率可达92.85%。MTT及流式结果显示，低MOI时，软骨细胞活力及凋亡率与对照组相比差异无统计学意义；当高MOI（200）时，细胞活力[（81.32±10.72）%]明显低于对照组，而细胞凋亡率[（21.37±2.80）%]明显高于对照组。