目的 探讨经尾静脉输注AdCTLA4Ig转染的BMSCs诱导同种异体大鼠肢体移植免疫耐受的可能性及其机理,为临床肢体移植诱导免疫耐受提供新的思路和方法。 方法 (1)采用Adeasy同源重组腺病毒载体系统,构建携带融合基因CTLA4-Ig 的重组腺病毒,测定滴度;并用其转染BMSCs,RT-PCR检测外源基因CTLA4-Ig的表达。 (2)构建肢体移植大鼠模型,随机分为A、B、C
目的探讨经尾静脉输注AdCTLA4Ig转染的BMSCs诱导同种异体大鼠肢体移植免疫耐受的可能性及其机理,为临床肢体移植诱导免疫耐受提供新的思路和方法。
方法(1)采用Adeasy同源重组腺病毒载体系统,构建携带融合基因CTLA4-Ig 的重组腺病毒,测定滴度;并用其转染BMSCs,RT-PCR检测外源基因CTLA4-Ig的表达。
(2)构建肢体移植大鼠模型,随机分为A、B、C、D四组。A组:空白对照组; B组:静脉注射BMSCs; C组:静脉注射AdCTLA4-Ig; D组:静脉注射AdCTLA4-Ig转染的BMSCs。检测移植肢体发生排斥反应时间、存活时间;观测移植肢体皮肤病理形态学改变,ELISA方法检测移植大鼠细胞因子IL-2的水平变化。
结果(1)成功构建了携带基因CTLA4Ig的重组腺病毒,滴度为1.0*109efu/ml,并能有效感染骨髓间质干细胞,使骨髓间质干细胞表达CTLA4Ig。
(2)肢体移植物存活时间,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。
(3)肢体移植物排斥反应出现时间,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。
(4)肢体移植术后5天细胞因子IL-2水平,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。
(5)肢体移植术后5天移植肢体皮肤病理检查,空白对照组可见重度淋巴细胞浸润、输注BMSCs和输注AdCTLA4-Ig组可见中度淋巴细胞浸润;输注 AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组可见轻度淋巴细胞浸润。
结论
尾静脉输注AdCTLA4-Ig转染BMSCs可诱导免疫耐受,并优于单独输注AdCTLA4-Ig和BMSCs组。
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