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骨科

经尾静脉输注AdCTLA4-Ig转染的供体特异性骨髓间质干细胞诱导大鼠异体肢体移植特异性免疫耐受

作者:岳宪虎 来源:2014COA论文汇编 日期:2015-02-26
导读

   目的 探讨经尾静脉输注AdCTLA4Ig转染的BMSCs诱导同种异体大鼠肢体移植免疫耐受的可能性及其机理,为临床肢体移植诱导免疫耐受提供新的思路和方法。    方法 (1)采用Adeasy同源重组腺病毒载体系统,构建携带融合基因CTLA4-Ig 的重组腺病毒,测定滴度;并用其转染BMSCs,RT-PCR检测外源基因CTLA4-Ig的表达。   (2)构建肢体移植大鼠模型,随机分为A、B、C

目的探讨经尾静脉输注AdCTLA4Ig转染的BMSCs诱导同种异体大鼠肢体移植免疫耐受的可能性及其机理,为临床肢体移植诱导免疫耐受提供新的思路和方法。

方法(1)采用Adeasy同源重组腺病毒载体系统,构建携带融合基因CTLA4-Ig 的重组腺病毒,测定滴度;并用其转染BMSCs,RT-PCR检测外源基因CTLA4-Ig的表达。

  (2)构建肢体移植大鼠模型,随机分为A、B、C、D四组。A组:空白对照组; B组:静脉注射BMSCs; C组:静脉注射AdCTLA4-Ig; D组:静脉注射AdCTLA4-Ig转染的BMSCs。检测移植肢体发生排斥反应时间、存活时间;观测移植肢体皮肤病理形态学改变,ELISA方法检测移植大鼠细胞因子IL-2的水平变化。

结果(1)成功构建了携带基因CTLA4Ig的重组腺病毒,滴度为1.0*109efu/ml,并能有效感染骨髓间质干细胞,使骨髓间质干细胞表达CTLA4Ig。

  (2)肢体移植物存活时间,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。

  (3)肢体移植物排斥反应出现时间,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。

  (4)肢体移植术后5天细胞因子IL-2水平,各治疗组移植物存活时间均显著长于对照组(P<0.05); 输注AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组植物存活时间均显著长于输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组; 输注BMSCs、输注AdCTLA4-Ig组无明显差别。

  (5)肢体移植术后5天移植肢体皮肤病理检查,空白对照组可见重度淋巴细胞浸润、输注BMSCs和输注AdCTLA4-Ig组可见中度淋巴细胞浸润;输注 AdCTLA4-Ig转染的BMSCs组可见轻度淋巴细胞浸润。

结论

  尾静脉输注AdCTLA4-Ig转染BMSCs可诱导免疫耐受,并优于单独输注AdCTLA4-Ig和BMSCs组。


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