目的 探讨白藜芦醇对脂多糖诱导下软骨细胞炎症因子表达的影响及其相关机制的研究。 方法无菌条件下体外分离培养C57BL/6J小鼠膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原免疫荧光检测进行软骨细胞鉴定。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测白藜芦醇和脂多糖(LPS)对软骨细胞增殖活力影响,根据加入的不同培养物,分为3组:LPS组(加入1ug/ml LPS刺激6
目的探讨白藜芦醇对脂多糖诱导下软骨细胞炎症因子表达的影响及其相关机制的研究。
方法无菌条件下体外分离培养C57BL/6J小鼠膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原免疫荧光检测进行软骨细胞鉴定。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测白藜芦醇和脂多糖(LPS)对软骨细胞增殖活力影响,根据加入的不同培养物,分为3组:LPS组(加入1ug/ml LPS刺激6小时);白藜芦醇组(加入100uM白藜芦醇刺激12小时后加入1ug/ml LPS);空白对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组软骨细胞中I-κBa的表达量,细胞免疫荧光染色观察NF-κB 核转位情况, RT-PCR测Ⅱ型胶原蛋白、IL-1β和TNF-α的mRNA表达量。
结果荧光显微镜下可见所培养细胞的胞核被DAPI染为蓝色,而胞质呈红色荧光,证明该细胞为软骨细胞;CCK8检测三组增殖活性分别为(98.60±9.18),(100±5.25),(96.30±6.5)表明白藜芦醇和脂多糖在实验所采用的浓度下对软骨细胞均无毒性作用;ELISA检测可见I-κBa表达量LPS组(41.55 ± 3.828)ng/L低于空白对照组(71.18 ± 3.830,P<0.01)ng/L,而白藜芦醇组(85.02 ± 6.331)ng/L明显高于LPS组(P<0.01)ng/L;细胞免疫荧光染色与空白对照组相比可见LPS组中NF-κB 发生明显的核转位,而白藜芦醇组中NF-kB的和核转位受到抑制。RT-PCR检测结果显示,与对照组相比LPS组IL-1β和TNF-α的mRNA表达量上调,与LPS组相比白藜芦醇组IL-1β和TNF-α的mRNA表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论白藜芦醇可以通过抑制核因子-kB信号通路下调软骨细胞炎症因子的表达。
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