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骨科

人脐带间充质干细胞和乳鼠雪旺细胞复合壳聚糖/NT-3支架材料修复大鼠脊髓损伤的实验研究

作者:李志忠,焦根龙,周孝斌 来源: 2015COA论文汇编 日期:2016-04-19
导读

   目的:通过酶消化法在体外利用人脐带及乳鼠坐骨神经分离出脐带间充质干细胞和雪旺细胞并进行传代培养和鉴定,在体外与材料复合构建出壳聚糖-NT3细胞复合支架材料,并将其植入构建好的大鼠脊髓横断损伤模型中,通过设置相应的对照组及相关检测指标,检测细胞复合支架材料对大鼠脊髓横断损伤的修复效果。    方法:利用人脐带经胶原酶消化法分离、培养出脐带间充质干细胞,予传代并利用光学显微镜观察其形态,描绘出

目的:通过酶消化法在体外利用人脐带及乳鼠坐骨神经分离出脐带间充质干细胞和雪旺细胞并进行传代培养和鉴定,在体外与材料复合构建出壳聚糖-NT3细胞复合支架材料,并将其植入构建好的大鼠脊髓横断损伤模型中,通过设置相应的对照组及相关检测指标,检测细胞复合支架材料对大鼠脊髓横断损伤的修复效果。

方法:利用人脐带经胶原酶消化法分离、培养出脐带间充质干细胞,予传代并利用光学显微镜观察其形态,描绘出增殖曲线,用流式细胞仪进行鉴定。以SD新生乳鼠的坐骨神经分离出雪旺细胞并传代,以免疫组织化学方法和光学显微镜观察细胞形态进行鉴定。将传代后的脐带间充质干细胞和雪旺细胞与壳聚糖-NT3支架(由暨南大学理工学院提供)复合,构建出细胞复合材料,设计相应的动物实验分组,按分组情况植入相应植入物,通过行为学、影像学、组织学等相关检测指标观察脊髓损伤后的恢复效果。

结果:以酶消化法分离、传代脐带间充质干细胞,经流式细胞仪检测第3代细胞均统一高表达间充质干细胞标记(CD73、CD90、CD105)和黏附分子标记(CD54 、CD44、CD29、),不表达造血干细胞标记(CD45、CD40、CD34)和人类白细胞抗原标记(HLA-DR),利用酶消化法和分级沉淀法相结合从乳鼠坐骨神经中分离出雪旺细胞,并经光学形态观察和免疫细胞化学进行鉴定。构建出材料-细胞复合物,通过动物实验,并行影像学、组织学、行为学检测表明其对脊髓损伤有较好的修复效果。

结论:在体外成功建立了从人脐带及乳鼠坐骨神经中分离出脐带间充质干细胞及雪旺细胞的方法。所培养的细胞纯度高,增殖快,性状稳定,将其与壳聚糖-NT3支架复合构建的细胞复合材料通过相应的动物实验证实对大鼠脊髓横断损伤有较好的修复作用。

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