目的：在体外，成功地从健康足月产婴儿脐带组织中分离培养出干细胞，并探讨其生物学特性。构建梯度纳米纤维薄膜支架材料，观察与其生物相容性。检测人脐带间充质干细胞复合梯度纳米纤维薄膜支架材料构建细胞支架复合体及成骨、成软骨的效果。

方法:采用酶消化方法获得干细胞，并进行培养，同时观察细胞形态特征。采用MTT法对人脐带间充质干细胞的生长曲线和细胞增殖毒性进行检测，用流式细胞仪检测细胞免疫表型。用特殊的干细胞诱导培养体系对人脐带间充质干细胞行体外成骨、软骨方向诱导，并进行鉴定和观察细胞骨架结构的变化。制备梯度纳米纤维薄膜支架材料，并将人脐带间充质干细胞与梯度纳米纤维薄膜复合后进行联合培养，于体外行成骨、软骨诱导培养14天，MTT法测增殖曲线，倒置光学显微镜、扫描电子显微镜观察细胞粘附、成长情况，并评价其组织相容性。并行特异性染色鉴定评价细胞支架材料复合体成骨-软骨的效果。

结果:采用酶消化方法可以成功地得到高纯度、高活力人脐带间充质干细胞。MTT检测显示细胞成长增殖能力强。流式细胞仪对第3代的人脐带间充质干细胞进行检测结果均强烈表达CD13、CD29、CD44、 CD54、 CD73、 CD90、CD105，不表达CD14、 CD31、 CD34、 CD40、 CD45和HLA-DR。原子力显微镜观察可见该细胞具有成熟的间充质干细胞骨架及生物特性。对其进行成骨诱导培养后，碱性磷酸酶染色呈强阳性，茜素红染色可见明显钙结节，Von Kossa矿化结节染色呈阳性表达，原子力显微镜观察细胞具有成骨细胞的生物特性；人脐带间充质干细胞经成软骨诱导分化后，甲苯胺兰染色及阿尔新兰染色均呈强阳性，原子力显微镜观察细胞具有成软骨细胞的生物特性。用MTT法检测细胞增殖毒性显示支架材料浸提液对种子细胞没有毒性。MTT法、倒置光学显微镜、扫描电子显微镜示成骨、软骨细胞在梯度纳米纤维薄膜支架材料上吸附、增殖能力好，具有良好组织相容性。构建的组织工程骨-软骨通过特异性染色鉴定，显示细胞支架材料复合体成骨-软骨的效果良好。

结论:本实验成功地构建了一种体外稳定培养和扩增人脐带间充质干细胞的方法。所分离的人脐带间充质干细胞成分均一，增殖能力较强，生物学特性较稳定，并能在体外特殊的诱导条件下为成骨、软骨细胞。本实验所构建的梯度纳米纤维薄膜支架材料是一种具有良好生物相容性的支架材料，该支架材料是一种良好的骨-软骨移植的替代材料，具有广泛的应用价值。