目的:探索研究OGT(O-GlcNAc transferase:N-乙酰氨基葡萄糖转移酶)是否糖基化修饰AMPK(AMP-activated protein kinase:AMP依赖的蛋白激酶)及该修饰对AMPK激酶活性的影响; 方法:通过内源免疫共沉淀、体外糖基化实验、western-blot、糖基化质谱学方法研究OGT是否糖基化修饰AMPK,用OGT的抑制剂BADGP及OGA(O
目的:探索研究OGT(O-GlcNAc transferase:N-乙酰氨基葡萄糖转移酶)是否糖基化修饰AMPK(AMP-activated protein kinase:AMP依赖的蛋白激酶)及该修饰对AMPK激酶活性的影响;
方法:通过内源免疫共沉淀、体外糖基化实验、western-blot、糖基化质谱学方法研究OGT是否糖基化修饰AMPK,用OGT的抑制剂BADGP及OGA(O-GlcNAc ase:N-乙酰氨基葡萄糖糖苷水解酶)的抑制剂PUGNAc处理AMPK(+/+)或AMPK(-/-)的MEFs细胞,观察p-AMPKT172及下游蛋白P-ACC1的水平变化,用OGT的抑制剂BADGP处理细胞后通过油红O染色判断脂滴形成数量的变化;
结果:内源免疫共沉淀、体外糖基化实验、western-blot、糖基化质谱学鉴定明确了OGT可以糖基化修饰AMPK,在AMPK(+/+)MEFs组经给与PUGNAc处理后P-AMPK及下游蛋白P-ACC1上调,BADGP处理后细胞的P-AMPK和P-ACC1的水平均下调,油红O染色及定量分析结果显示BADGP处理组的脂肪酸合成显著增加;
结论:OGT可以与AMPK相互作用,同时OGT糖基化修饰AMPK并抑制AMPK的激酶活性,并影响其下游蛋白的磷酸化修饰;
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