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人破骨细胞与成骨细胞体外共培养的实验研究

作者：杨永良,周东生来源： 2015COA论文汇编日期：2016-04-04

导读

　　目的：建立破骨细胞培养以及和成骨细胞共培养的有效方法对于研究骨重建是非常重要的，目前关于成骨细胞及破骨细胞体外培养技术已经非常成熟，但是体外两种细胞的共培养较少，本研究旨在探索建立人破骨细胞体外培养以及成骨细胞与破骨细胞体外共培养的优化条件。　　方法：从人血白细胞层分离的外周血单核细胞并接种于预涂有poly-L-lysine的载玻片上，体外培养6天。在培养的第7天，将RANKL加入培养

关键字：成骨细胞 | 破骨细胞 | 共培养 | 条件

目的：建立破骨细胞培养以及和成骨细胞共培养的有效方法对于研究骨重建是非常重要的，目前关于成骨细胞及破骨细胞体外培养技术已经非常成熟，但是体外两种细胞的共培养较少，本研究旨在探索建立人破骨细胞体外培养以及成骨细胞与破骨细胞体外共培养的优化条件。

方法：从人血白细胞层分离的外周血单核细胞并接种于预涂有poly-L-lysine的载玻片上，体外培养6天。在培养的第7天，将RANKL加入培养细胞中诱导破骨细胞祖细胞向成熟破骨细胞分化并连续培养1周。在共培养体系中，成骨细胞接种于载玻片上培养24小时。将外周血单核细胞接种于成骨细胞的表面共培养，分别于共培养的第9、11、15天观察细胞形态。成熟的破骨细胞采用TRAP染色法检测。

结果：在预涂有poly-L-lysine溶液的载玻片上外周血单核细胞向破骨细胞具有较高的多向分化效率；在培养的第9天，我们观察到最显著的成熟的破骨细胞；该研究表明，共培养体系最佳的细胞接种比例为1:80（成骨细胞：外周血单核细胞）；共培养体系最佳的诱导条件为成骨细胞培养24小时后，在第2天将外周血单核细胞平铺于成骨细胞的表面。

结论：本研究的结果表明体外共培养的成骨细胞及破骨细胞的最佳细胞比例及最佳的诱导条件。