目的：超声靶向微泡破坏联合双靶向HSP72与HSC70促进前列腺癌细胞转染的安全性、靶向性、有效性验证。

　　 方法：在前期研究基础上对转染实验的UTMD参数进行优化。CCK-8试剂盒验证该方法的安全性。采用倒置荧光显微镜与流式细胞仪对前列腺癌细胞的转染效率进行定性与定量评估。转染后48 hr通过Western Blotting 检测TNF-α、IL-12蛋白的表达水平验证该方法的特异性与靶向性。Real-Time PCR与Western Blotting进一步从mRNA水平、蛋白水平考察对HSP70与HSP90的基因沉默效果。

　　 结果：转染时优化的最佳UTMD的参数组合为：1 W/cm2、60 s、1:5、1:5。安全性验证结果显示，UTMD联合双靶向HSP72与HSC70 siRNA组与双靶向HSP72与HSC70 siRNA组细胞OD值均降低，两者比较没有明显的差异(P = 0.268)。靶向性验证的Western blotting显示，UTMD联合双靶向HSP72/HSC70 siRNA组的IFN-α、IL-12蛋白表达较双靶向HSP72/HSC70 siRNA组明显下调 (P = 0.01)。倒置荧光显微镜与流式细胞仪检测结果显示，UTMD联合双靶向HSP72与HSC70组细胞Fam-siRNA的摄取率（DU-145：99.89%± 4.62%；VCaP：74.15% ± 2.78%）明显高于双靶向HSP72与HSC70组（DU-145：35.12% ± 3.70%；VCaP：40.37 %± 2.25%），两者之间有明显统计学差异 (P < 0.001)。qRT-PCR与 Western Blotting结果显示，在VCaP 与DU-145 细胞中，UTMD联合双靶向HSP72与HSC70 siRNA能特异显著的下调HSP72、HSC70、HSP90的mRNA水平与蛋白质水平 ( P <0.05)。

　　 结论：与双靶向HSP72与HSC70组相比，UTMD联合双靶向HSP72与HSC70组具有更高的siRNA递送和基因沉默效能，且具有较好的安全性与靶向性，表明UTMD联合双靶向HSP72与HSC70可以作为安全、高效的递送策略增强siRNA的递送和基因沉默效果。