兔膜联蛋白 A1基因短发夹 RNA慢病毒载体的构建与鉴定
目的：针对兔膜联蛋白A1基因构建短发夹RNA慢病毒载体，为后续观察沉默膜联蛋白A1对兔骨髓间充质干细胞和成骨细胞生物特性的影响，以及进一步探讨激素性股骨头缺血性坏死发生机制奠定实验基础。 方法： 针对兔膜联蛋白A1基因设计RNA干扰靶序列，合成Oligo DNA，退火形成双链DNA，与BamHI和EcoRI 双酶切后的pGLV/H1/GFP载体连接成pGLV-shANXA1，PCR
目的：针对兔膜联蛋白A1基因构建短发夹RNA慢病毒载体，为后续观察沉默膜联蛋白A1对兔骨髓间充质干细胞和成骨细胞生物特性的影响，以及进一步探讨激素性股骨头缺血性坏死发生机制奠定实验基础。
方法：针对兔膜联蛋白A1基因设计RNA干扰靶序列，合成Oligo DNA，退火形成双链DNA，与BamHI和EcoRI双酶切后的pGLV/H1/GFP载体连接成pGLV-shANXA1，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。pGLV-shANXA1和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3共转染293 FT细胞包装产生慢病毒载体LV-shANXA1，并根据GFP的表达测定慢病毒的滴度。
结果：经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目标序列一致，shANXA1片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP中。包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1-764、LV-shANXA1-844、LV-shANXA1-901、LV-shANXA1-NC的滴度分别为3.7×108TU/L、4.1×108TU/L、3.6×108TU/L、3.7×108TU/L。
结论：实验成功构建的兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体。
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