以天然骨基质明胶/软骨细胞外基质复合山羊椎间盘细胞构建一体化组织工程椎间盘的实验研究
目的：探讨以骨基质明胶/软骨细胞外基质复合山羊椎间盘细胞构建一体化组织工程椎间盘的可行性。 方法：以猪股骨、软骨为材料，利用脱细胞、冷冻干燥、交联等技术制备外层为骨基质明胶、中央为软骨细胞外基质的一体化纤维环-髓核双相支架。Hoechst 33258染色检测脱细胞情况，扫描电镜、HE染色观察支架结构，检测支架的孔隙率、吸水率以及压缩力学性能。分离培养山羊纤维环细胞及髓核细胞，分别接种
目的：探讨以骨基质明胶/软骨细胞外基质复合山羊椎间盘细胞构建一体化组织工程椎间盘的可行性。
方法：以猪股骨、软骨为材料，利用脱细胞、冷冻干燥、交联等技术制备外层为骨基质明胶、中央为软骨细胞外基质的一体化纤维环-髓核双相支架。Hoechst 33258染色检测脱细胞情况，扫描电镜、HE染色观察支架结构，检测支架的孔隙率、吸水率以及压缩力学性能。分离培养山羊纤维环细胞及髓核细胞，分别接种至支架的纤维环相及髓核相上，体外培养2 d，扫描电镜、HE染色观察细胞在支架上的粘附情况，LIVE/DEAD染色观察细胞在支架上的活性；培养2w和4w，Real-time PCR检测支架中细胞的Ⅰ、Ⅱ型胶原、聚集蛋白多糖的基因表达水平。将纤维环细胞及髓核细胞进行PKH26标记，接种至支架的相应部位，植入裸鼠皮下培养，6w后小动物活体荧光成像系统检测体内细胞支架复合物荧光分布情况，取出细胞支架复合物，行Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化染色以及番红O染色。
结果：大体观察一体化支架与天然椎间盘结构相似，Hoechst33258染色示支架材料无细胞残留；扫描电镜下支架孔隙分布均匀，孔隙相互连通，纤维环相孔径为（372.3±139.8）μm，髓核相孔径为（112.4±21.8）μm；HE染色显示支架交界区连接紧密；支架孔隙率为73.37%±2.56%，吸水率为655.7%±78.6%；压缩弹性模量为49.06±15.57 kPa。细胞接种到支架体外培养2 d后，扫描电镜、HE染色示两种细胞在支架上粘附良好，LIVE/DEAD染色示细胞活性良好；Real time PCR检测示支架上细胞的聚集蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原基因表达水平均比正常椎间盘细胞显著增高。PKH26标记的细胞支架复合物体内培养6w后，小动物活体荧光成像系统显示在髓核相及纤维环相上均可见有荧光分布；纤维环相及髓核相Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性，Ⅱ型胶原免疫组化染色弱阳性，番红O染色两相均呈阳性。
结论：以天然骨基质明胶/软骨细胞外基质复合山羊椎间盘细胞可以初步构建一体化组织工程椎间盘。 论：以天然骨基质明胶/软骨细胞外基质复合山羊椎间盘细胞可以初步构建一体化组织工程椎间盘。
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