胚胎大鼠脊髓神经元原代培养方法的改进
目的 在以往研究者的基础上结合本课题组多次重复试验认真总结经验，拟探讨建立一套高效、稳定、活性好、纯度高的体外脊髓神经元原代培养方法。 方法 取E16D的SD大鼠的脊髓组织，剔除干净脊膜、血管膜后，用0.125%的胰酶联合DNA酶消化脊髓组织为单细胞悬浮液，边消化边收集单细胞直至脊髓组织消化完全，经差速贴壁后接种于含血清的培养基中，4小时后培养基换成Neurobasal无血清培养基，
目的 在以往研究者的基础上结合本课题组多次重复试验认真总结经验，拟探讨建立一套高效、稳定、活性好、纯度高的体外脊髓神经元原代培养方法。
方法 取E16D的SD大鼠的脊髓组织，剔除干净脊膜、血管膜后，用0.125%的胰酶联合DNA酶消化脊髓组织为单细胞悬浮液，边消化边收集单细胞直至脊髓组织消化完全，经差速贴壁后接种于含血清的培养基中，4小时后培养基换成Neurobasal无血清培养基，3天后用阿糖胞苷作用48小时，采用倒置显微镜观察神经元细胞形态；台盼蓝染色法检测细胞的存活率；NSE、TUBB3、DAPI免疫荧光双标对脊髓神经元进行鉴定。
结果 4h后大部分神经元都已贴壁，细胞呈圆形或椭圆形，胞体均匀透亮，周围可见光晕，少数神经元长出小突起；1 d后超过半数神经元长出短小的突起，细胞形态慢慢变得不规则，培养基内可见悬浮未贴壁的死亡细胞和碎片；3d后神经元胞体逐渐变得肥大饱满呈三角形、梭性或椭圆形等，突起变长，同时可见少量胶质细胞；5d后细胞数量稳定，胞体饱满，胞质均匀，立体感强，周围光晕明显，突起进一步伸长，细胞密度较高的区域邻近细胞相互形成连接，胶质细胞明显减少；脊髓神经细胞生长状态良好，存活率高，存活率为（97.74%±0.88%），NSE、TUBB3、DAPI均阳性细胞所占比例大，神经元纯度为(95.63%±1.74%)，多次重复实验间没有统计学差异（P﹥0.05）。
结论 该研究从脊髓神经元原代培养的各个方面做了系统改进和说明，培养出了纯度高、活性好、状态佳的脊髓神经元细胞。
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