OPG／RANKL／RANK系统关键分子TRAF6蛋白相互作用蛋白的筛选和鉴定
目的：探究骨代谢OPG／RANKL／RANK系统下游关键分子TRAF6蛋白在宿主细胞中的功能，筛选和寻找能够与TRAF6相互作用的蛋白并研究其功能。方法：本实验运用酵母双杂交技术，构建pGBKT7-TRAF6重组质粒，转化酵母菌株AH109，在含重组质粒的酵母菌株中转入人B淋巴细胞cDNA文库，进行筛选，回复性验证实验排除假阳性，NCBI数据库BLAST比对筛选结果，再次构建含有TRAF6
目的：探究骨代谢OPG／RANKL／RANK系统下游关键分子TRAF6蛋白在宿主细胞中的功能，筛选和寻找能够与TRAF6相互作用的蛋白并研究其功能。方法：本实验运用酵母双杂交技术，构建pGBKT7-TRAF6重组质粒，转化酵母菌株AH109，在含重组质粒的酵母菌株中转入人B淋巴细胞cDNA文库，进行筛选，回复性验证实验排除假阳性，NCBI数据库BLAST比对筛选结果，再次构建含有TRAF6、BCL3基因片段及特异性标签的两个重组质粒pcDNA3.1-His-TRAF6、pCMV-3FLAG-BCL3-EGFP，共转染入293T细胞，在细胞中稳定表达。运用免疫共沉淀的方法证明TRAF6和BCL3可以在人细胞中发生相互作用。结果：得到能够在酵母双杂交系统中与TRAF6相互作用的蛋白11个，免疫共沉淀法验证了TRAF6蛋白能与其中选取的BCL3蛋白相互作用。结论：本研究通过酵母双杂交系统筛选出了与TRAF6 相互作用的蛋白，并通过免疫共沉淀的方法进一步验证了BCL3与TRAF6在293T细胞中的相互作用，为TRAF6蛋白的功能探讨提供了新途径。OPG／RANKL／RANK系统将骨代谢、免疫系统和内分泌系统紧密地联系起来，为强直性脊柱炎、骨质疏松及癌症骨转移等骨破坏性疾病的治疗开辟了新的途径。
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