目的AHSG基因于肝脏特异性表达，其编码合成的产物称fetuin-A，对骨质疏松症的发生起保护作用，是骨质疏松症的重要易感基因。本研究中，我们通过动物模型及培养细胞验证雌激素对AHSG基因的转录调控作用，利用荧光素酶报告基因载体及其它分子生物学实验具体分析雌激素调节AHSG基因转录的可能机制，为绝经后骨质疏松的发病提供新的理论依据。

材料与方法利用OVX Wistar骨质疏松大鼠建立绝经后骨质疏松模型。采集大鼠血、尿，解剖分离肝脏及股骨。测定骨质疏松相关参数。ELISA检测大鼠血清Ahsg水平。提取大鼠肝脏中RNA和蛋白质，检测Ahsg的表达。培养人肝癌细胞系HepG2细胞，转染ERα表达载体，施加刺激并检测AHSG的表达。 扩增1554/+53AHSG启动子区域，构建荧光素酶报告基因载体，并进行系列截短，寻找雌激素敏感的AHSG启动子区域。提取HepG2细胞核蛋白，EMSA鉴定1482AP-1反应元件。ChIP, re-ChIP, 和Co-IP分析ERα和c-Jun/c-Fos在1482 AP-1结合位点处的相互作用。

结 果OVX大鼠呈现绝经后骨质疏松表型。与对照组相比，血清AHSG水平、肝脏AHSGmRNA及蛋白的表达明显降低。与对照组相比，用E2/ERα处理的HepG2细胞AHSGmRNA升高了1.6倍。AHSG启动子-荧光素酶报告基因检测发现进一步截短丢失1482 AP-1反应元件后，失去了对E2/ERα的反应性。EMSA发现HepG2细胞的核提取物与野生型1482AP-1寡核苷酸探针形成特异性结合带，可被E2/ERα增强，被冷探针抑制，能形成supershif。ChIP表明HepG2细胞的核提取物分别与c-Jun, c-Fos和ERα抗体免疫沉淀后，PCR扩增AHSG1482 AP-1反应元件的启动子区域呈阳性，re-ChIP试验仍有特异性扩增。Co-IP发现HepG2细胞的核提取物与c-Jun抗体免疫沉淀后，能够与ERα抗体Western blot得出阳性结合带，反之亦然，c-Jun与ERα的结合可以被E2/ERα加强。

结论AHSG的转录与表达在OVX骨质疏松大鼠及HepG2细胞中都存在雌激素反应性。雌激素通过ERα与c-Jun/c-Fos形成转录复合物，结合于AHSG启动子1482 AP-1反应元件，实现对AHSG的转录激活作用。