二维单层和三维微团培养对关节软骨细胞表型的影响
目的 关节软骨细胞在体外培养过程中，极易丢失表型，出现去分化。本研究对比分析二维单层（monolayer）培养和三维微团（micropellet）培养两种方法对关节软骨细胞表型维持的影响，优化软骨细胞培养体系。 方法 本研究以新西兰大白兔关节软骨为研究对象，选取高密度单层培养和微团培养分别作为2D和3D培养模型。在用成软骨诱导培养基（DMEM高糖培养基，含有2%胎牛血清、1%
目的关节软骨细胞在体外培养过程中，极易丢失表型，出现“去分化”。本研究对比分析二维单层（monolayer）培养和三维微团（micropellet）培养两种方法对关节软骨细胞表型维持的影响，优化软骨细胞培养体系。
方法本研究以新西兰大白兔关节软骨为研究对象，选取高密度单层培养和微团培养分别作为2D和3D培养模型。在用成软骨诱导培养基（DMEM高糖培养基，含有2%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液、1% ITS、50ug/ml抗坏血酸、100nM地塞米松及10ng/ml TGF-β）培养2周后，通过HE染色和阿尔新蓝染色观察软骨细胞和基质分布；通过免疫组化和免疫荧光半定量观察I型胶原、II型胶原、aggrecan表达；最后通过RT-PCR定量分析两种培养方法在Col1A1，Col2A1，ACAN基因表达上的差异。
结果高密度二维培养兔软骨细胞，2周后软骨细胞多层分布，HE染色显示细胞呈圆形，细胞间联系较密，阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌较少；微团培养方法培养兔软骨细胞，2周后形成肉眼可见的白色组织，HE染色显示细胞呈多边形，细胞较分散，阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌明显多于二维培养，差异有统计学意义。PCR结果显示微团培养的软骨细胞在Col2A1，ACAN基因表达上优于高密度二维培养。
结论三维微团培养方法培养软骨细胞，有利于软骨细胞分泌II型胶原和多糖基质，维持稳定的表型。
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