目的初步探讨通过构建aFGF基因真核表达载体转染大鼠肌卫星细胞（MSCs）建立细胞工程种子细胞可行性

方法首先提取人类肌肉组织总RNA，RT-PCR法调取aFGF基因，然后用直接化学合成法合成人类白细胞介素2信号肽序列（signal peptide sequence，SPS），通过基因融合得到SPS-aFGF，再通过定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1，最终得到重组质粒PEGFP-N1-SPS-aFGF，对重组质粒做测序和酶切鉴定；差速贴壁法获取大鼠MSCs，观察细胞形态，做免疫荧光鉴定；经鉴定正确的细胞随机分为3组：目的基因组（aFGF+N1）、空载质粒组（N1）、空白对照组（Blank），前两组分别加入质粒PEGFP-N1-SPS-aFGF与pEGFP-N1质粒，空白对照不加入任何质粒，均在脂质体Lipofectamine 2000^TMReagent介导下转染，转染后荧光显微镜统计发绿色荧光的细胞占各组细胞比例，计算转染效率；转染72h后利用实时荧光定量PCR与Western blot检测aFGF基因在MSCs中表达情况

结果1.重组质粒测序结果与GenBank公布的序列一致，酶切鉴定条带与实际大小相符；2.荧光显微镜下观察到转染细胞有荧光表达，并在转染72h达到最高峰；3.转染后72h，实时荧光定量PCR结果显示目的基因组表达量平均相对比值（aFGF+N1）组(1464.96)显著高于N1组（1.016）、Blank组（1.000），差异有统计学意义(P<0．05)。Western blot检测显示aFGF表达呈极强阳性，而N1组及Blank组aFGF表达极弱

结论成功构建aFGF基因真核表达载体并转染MSCs，aFGF在MSCs内高表达，此种方法有希望获取具备特殊生物学功能细胞。