目的探究D1细胞系成骨分化机理，分析成骨培养基中抗坏血酸钠和β-甘油磷酸盐对成骨分化的影响及可能参与其分化的信号通路。方法将D1细胞随机分成17组，第1组：加入低糖的细胞培养基、胎牛血清和青链霉素，BM”；第2组：加入低糖的细胞培养基、胎牛血清、10ug/ml抗坏血酸钠和l青链霉素；第3组：加入低糖的细胞培养基、胎牛血清、50ug/ml抗坏血酸钠和青链霉素；第4组：加入低糖的细胞培养基、胎牛血清、10mM β-甘油磷酸盐和l青霉素；第5组: 加入低糖的细胞培养基、 胎牛血清、10ug/ml抗坏血酸钠、10mM β-甘油磷酸盐和青链霉素; 第6组: 加入低糖的细胞培养基、 胎牛血清、50ug/ml抗坏血酸钠、10mM β-甘油磷酸盐和青链霉素; 第7组：加入低糖的细胞培养基、 胎牛血清、1mM β-甘油磷酸盐和l青链霉素; 第8组: 加入低糖的细胞培养基、 胎牛血清、10ug/ml抗坏血酸钠、 1mM β-甘油磷酸盐和l青链霉素; 第9组: 加入低糖的细胞培养基、 胎牛血清、50ug/ml抗坏血酸钠、1mM β-甘油磷酸盐和青链霉素; 第10组：对照组2:标准培养液 (低塘细胞培养基+胎牛血清+50ug/ml抗坏血酸钠 +青链霉素); 第11组：对照组2+10mMβ-甘油磷酸盐,成骨OM组; 第12组：对照组2+p38MAPK丝裂原激活蛋白激酶抑制剂; 第13组：对照组2+10mMβ-甘油磷酸盐+ p38MAPK丝裂原激活蛋白激酶抑制剂; 第14组：对照组2+JNK氨基末端蛋白激酶抑制剂; 第15组: 对照组2+10mMβ-甘油磷酸盐+JNK氨基末端蛋白蛋白激酶抑制剂; 第16组：对照组2+AKT苏氨酸蛋白激酶抑制剂; 第17组：对照组2+10mMβ-甘油磷酸盐+AKT苏氨酸蛋白激酶抑制剂。；分组孵育细胞6天后，通过茜素红染色法评价成骨分化；分别孵育细胞15分钟和60分钟后分析成骨分化相关基因Runx2和BSP及信号通道基因AKT蛋白表达水平。结果抗坏血酸钠联合β-甘油磷酸盐染色结果强于单独应用抗坏血酸钠和单独应用β-甘油磷酸盐，同时还增加细胞中Runx2、BSP和P-APK蛋白水平的表达。结论成骨培养基中抗坏血酸钠和β-甘油磷酸盐能够促进D1细胞成骨分化，且可能同过AKT信号通道起作用；而且p38MAPK和JNK也参与细胞成骨分化信号转导。