作者：郜桂菊，朱春雨，刘颖楚，杨思源，肖江，赵红心，杨涤， 梁洪远 ，王芳， 吴亮，张福杰 ，倪量

第一作者及单位：朱春雨，首都医科大学附属北京地坛医院;刘颖楚，首都医科大学全科医学与继续教育学院;杨思源，首都医科大学附属北京地坛医院感染病中心实验室

通讯作者及单位：郜桂菊，首都医科大学附属北京地坛医院感染病临床研究中心

来源：Med Sci Monit. 2022.11(5);28:e937264

Performance of Xpert MTB/RIF for Diagnosis of Tuberculosis in HIV-Infected People in China: A Retrospective, Single-Center Study

Guiju Gao Chunyu Zhu, Yingchu Liu, Siyuan Yang, Jiang Xiao, Hongxin Zhao, Di Yang, Hongyuan Liang , Fang Wang , Liang Wu, Fujie Zhang, Liang Ni

doi：10.12659/MSM.937264

研究背景

艾滋病和结核病仍然是主要的公共卫生问题。传统上，结核分枝杆菌培养一直被作为诊断结核病的金标准，但结核分枝杆菌(MTB)生长缓慢，一般需要2～6周培养时间，同时受限于标本的含菌量。抗酸染色涂片(AFB)价格低廉且快速，是中低等收入国家广泛使用的结核病诊断方法，但是敏感度差，阳性率低。这两种诊断方法一定程度上影响了结核病的诊断及治疗。根据世界卫生组织2020年全球结核病报告：2020年全球约有820,000名HIV/TB感染患者(占结核病患者总数的8.2%)，其中有214000人死于HIV/TB感染。考虑到HIV人群感染MTB的风险远高于非HIV人群，在高流行地区开展及时诊断和治疗显得至关重要。值得注意的是，在过去的十几年内，中国已经成为新发结核病例最多的国家之一(尽管HIV保持在较低流行水平)。

T-SPOT.TB是一种新的诊断结核病的免疫检测方法，近年来在中国得到广泛应用，但HIV患者长期处于免疫抑制状态，T-SPOT.TB诊断性能可能会受限于CD4+T淋巴细胞数量。而Xpert MTB/RIF (Cepheid, Sunnyvale, CA, USA)是一种自动实时 PCR的快速检测方法，可在两小时内检测 MTB复合物和利福平耐药性，被世界卫生组织(WHO)推荐为对具有结核病症状和体征的人群进行初步诊断，2014年WHO指出Xpert优于常规检测(包括AFB、培养或组织病理学)。但以上结果大多数是针对单纯结核分枝杆菌感染的研究，在HIV感染人群中的临床研究较少。因此，需要进一步评估Xpert在HIV/TB感染患者中的诊断性能，为HIV感染人群的结核病诊断提供一定参考价值。

研究设计与方法

研究设计：本研究共纳入了413例从2018年1月至 2020年5月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院确诊的HIV患者。根据世界卫生组织指南和中华人民共和国国家卫生健康委员会指南制定以下筛选标准：(1)年龄>18岁，且HIV-1抗体阳性;(2)排除处于急性感染期的HIV患者或合并恶性肿瘤的患者;(3)PTB(肺结核)患者：MTB培养阳性，或AFB涂片阳性以及符合活动性肺结核特征的影像学表现;(4)EPTB(肺外结核)患者：明确的涉及肺以外器官的结核病患者，MTB从非肺源性组织中分离，或有符合活动性EPTB组织学强有力的临床证据。最终，有236例被排除分析之外(139例非结核患者，42例缺失培养结果，20例缺失Xpert结果，29例缺失AFB结果，6例缺失标本)。最终纳入研究177例，其中包括PTB(145例)，EPTB(32例)。

检测方法：

1.结核分枝杆菌培养：将收集到的标本置入离心管中，用N -乙酰半胱氨酸和氢氧化钠处理样本 ，震荡20s使其充分混合均匀，在室温下静置15min，放入离心器中3000r/min水平进行离心，并重新悬浮在1.5ml磷酸盐缓冲液中，使用BACTEC MGIT 960系统(BD微生物系统)将制备好的样品接种到固体培养基。

2.抗酸染色涂片镜检：根据抗酸染色涂片镜检操作要求进行操作，随机选取300个不同视野进行检测，若发现抗酸杆菌则为阳性，反之为阴性。

3.T-SPOT.TB：根据制造商的说明，收集患者的肝素化血液并用于T-SPOT®.TB 测试(Oxford Immunotec，Oxford，UK)。当阴性和阳性质量得到控制时，如果面板A或面板 B 的点数≥6,则结果被认为是阳性的。

4.Xpert检测：Xpert MTB/RIF试剂以2:1的比例添加到标本中。如果标本体积<1ml，以3:1的比例向标本中加入试剂，以达到体积要求，并离心15min。将封闭标本在室温下剧烈搅拌15min。然后，将2ml样品转移到试剂盒中，并插入测试平台，Xpert 自动进行DNA提取、核酸扩增、结核分枝杆菌特异核酸检测、利福平耐药基因rpoB突变等检测，2～3h出结果。如果样品没有立即进行Xpert MTB/RIF处理，则按照建议将其储存在2～8℃。

研究结果

1.PTB、EPTB和总病例中Xpert、AFB、T-SPOT.TB的性能：Xpert、AFB和T-SPOT.TB的阳性率分别为42.3%(75/177)，32.7%(58/177)和72.8%(129/177)。与金标准相比，AFB的诊断性能(AUC=0.713，95%CI:0.722～0.783;敏感度58.3%,95%CI:28.5～83.5%;特异度76.3%,95%CI:69.4%～82.4%)，显著高于T-SPOT.TB(AUC=0.564，95%CI:0.579～0.648;敏感度91.6%,95%CI:16.0%～33.4%;特异度21.2%,95%CI:15.4%～28.3%)(P<0.001)。Xpert的诊断性能最好(AUC=0.798，95%CI:0.819～0.871，敏感度83.3%，95%CI:59.5%～97.2%，特异度84.2%，95%CI:77.5%～89.2%)，显著高于其他两种方法(P<0.001)(图1和表1)。

表1 Xpert、AFB和T-SPOT.TB在检测PTB、EPTB和总病例中的表现

抗酸杆菌(AFB);阳性预测值(PPV);负预测值(NPV);肺结核(TB)

aFisher精确P=0.021，用于比较PTB中Xpert和AFB的敏感性

bXpert或AFB与T-SPOT.TB的敏感性或特异性之间的统计学差异，卡方检验 (X2),P<0.001

图1

2.Xpert在PTB和EPTB不同样本中的准确性：在肺部样本中，BALF的敏感性(100%,95%CI：19.7～100)和特异性(81.2%,95%CI：69.1～89.5)均高于痰液。在肺外标本中，CSF特异性最高(95.0%，95%CI:73.1～99.7),尿液特异性最低(50.0%,95%CI:2.6～97.3)(表2)。

表2 Xpert在不同标本中的敏感性和特异性

支气管肺泡灌洗液(BALF)，脑脊液(CSF)，不可用(NA)

a如果检测的阳性病例少于3例，则不进行计算

3.在CD4<200cells/μl的患者中，Xpert、AFB和T-SPOT.TB的诊断性能：对于CD4<200cells/μl的患者，Xpert和T-SPOT.TB的敏感性均为90.0%(95% CI:54.1%～99.4%),显著高于AFB涂片60.0%,(95% CI:27.3%～86.3%)(P<0.001)。Xpert特异性为84.8%(95% CI:77.6%～90.1%),AFB特异性为75.5%,(95%CI:67.3%～82.2%),显著高于T-SPOT.TB 21.5 %, (95%CI:15.2～29.5)(P<0.001)(表3)。

表3Xpert、AFB和T-SPOT.TB的性能比较。CD4+<200cell/mm3时肺结核的诊断

aXpert、AFB和T-SPOT.TB的敏感性或特异性之间的统计学差异，卡方检验 (X2),P<0.001

研究结论

Xpert的特异性高于AFB和T-SPOT.TB;即使是在CD4+<200 cells/μl的HIV患者中，Xpert依然显示出较高的诊断准确性。研究结果支持在HIV患者中使用Xpert作为结核病的诊断方法，而且Xpert在检测利福平耐药方面有着突出的优势。