感染

严重急性呼吸综合征病原初步查明

作者:照日 文清 峡江 来源:中国医学论坛报 日期:2003-04-17
导读

         日前,科学家们已经完成导致严重急性呼吸综合征(SARS,即非典型肺炎)病毒的测序,并提议以确定SARS暴发流行和治疗越南首例SARS病人而染病身亡的  Urbani医师命名该病毒——Urbani SARS-相关冠状病毒(Urbani SARS-associated  coronavirus),以纪念这位WHO医师。他们以细胞培养和分子技术从SARS病人的临床标本中寻找了未知的病毒。

  日前,科学家们已经完成导致严重急性呼吸综合征(SARS,即非典型肺炎)病毒的测序,并提议以确定SARS暴发流行和治疗越南首例SARS病人而染病身亡的 Urbani医师命名该病毒——Urbani SARS-相关冠状病毒(Urbani SARS-associated coronavirus),以纪念这位WHO医师。全球SARS工作组宣布,这种新的冠状病毒在SARS发病中起主要作用。

  加拿大和美国的研究人员近日都宣布,他们完成了冠状病毒基因组测序。美国CDC主任Gerberding说,研究人员可以使用该信息开始研制靶向抗病毒药物、疫苗和实验室诊断试剂。有专家称,这是向控制和战胜SARS蔓延迈出了一大步。

  4月8日和4月10日先后在在线出版的Lancet和N Engl J Med 上发表了三篇有关致病病毒为新的冠状病毒的论文。

  中国香港:冠状病毒是SARS可能原因

  中国香港的研究人员Peiris等报告了(Lancet 2003, 361∶9365)50例SARS病人的临床表现和病毒学研究结果。强有力的证据表明,新冠状病毒可能是SARS的致病原因。

  研究者分析了50例SARS病人的病史记录和微生物学研究结果,这50例病人是来自5个以上的独立的流行病学联系的传播聚集群。他们通过胸部X线检查、鼻咽部抽吸物和血清标本的实验室检查来调查病原体。对这些病人的实验室结果与其他呼吸道疾病患者的微生物学检查结果进行了比较。

  结果显示,发热、寒战、肌痛和咳嗽是最常见的症状。与胸部X线变化相比,呼吸道症状和听诊结果不成比例地显著轻微。年龄较大、淋巴细胞减少、肝功能异常与严重疾病相关。2例病人分离出一种属于冠状病毒属的病毒。采用这种病毒的特异性血清学和逆转录酶PCR试验的测试结果显示,50例SARS病人中的45例,而对照组中无一例,有该病毒感染的证据。

  从SARS病人中分离出的冠状病毒可能是与该病相关的主要病原体。对这种病毒特异的血清学和分子学试验可以对病人做出确切的实验室诊断,并可以进行深入研究以明确其他辅助因素是否在疾病发展过程中起作用。

  美国:新冠状病毒与SARS暴发相关

  美国疾病控制和预防中心国立传染病中心Ksiazek等报告[www.nejm.org April 10, 2003 (10.1056/NEJMoa030781v2.pdf)],他们收到了6个国家(或地区)的临床标本并用病毒分离技术、电子显微镜和组织学研究,以及分子和血清学检验对其进行了测试,以图从大范围可能的病原体中识别(出本综合征的病原)。

  研究者称,没有恒定地识别出经典的呼吸道的或细菌性呼吸道病原体。然而,从符合SARS定义的病人标本中分离出了一种新的冠状病毒。在接种了咽拭子标本的Vero E6细胞中以显微镜检查看到了细胞病理学特征。培养(细胞)的电子显微镜检查揭示了具有冠状病毒特征的超微结构特征(图1)。免疫组织化学和免疫荧光染色展示了与I组冠状病毒多克隆抗体的反应性。为了用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增(冠状病毒)聚合酶基因的片段,他们设计并使用了冠状病毒共有(序列)的引物,以取得一段序列,该序列清楚地识别了上述分离物是一种独特的冠状病毒,它与以往测过序的冠状病毒只有较远的关系。研究者用特异的诊断用RT-PCR引物,在12例不同地点的病人中识别出了数个相同的核苷酸序列,这一结果与从一个点发源的暴发一致。以此新的冠状病毒制备的间接荧光抗体试验(见图2)和酶联免疫吸附检测法已被用于证实病毒特异性血清学反应。初步研究提示,此病毒以往可能从未感染美国人群。

  SARS相关冠状病毒的超微结构特征

  图1 在Vero E6细胞中生长的SARS相关冠状病毒的超微结构特征。一个冠状病毒颗粒,有内部螺旋状核衣壳样结构以及围绕颗粒外边的棒状表面突起。这些所见都是冠状病毒的典型特点。图中短线长度为100 nm。

 Vero E6细胞

  图2 接种了SARS病人口咽分泌物的Vero E6细胞。以间接荧光抗体检测时显示,受感染的细胞与1例SARS病人的恢复期血清发生反应(×400)。

  研究者得出的结论是, 一种新的冠状病毒与此次暴发相关,而且有证据表明,此病毒在SARS中起了一种病原学的作用。他们提议将此病毒命名为Urbani SARS-相关病毒。

  德国:SARS病人中查出新冠状病毒

  德国汉堡国立热带传染病参考中心Bernhard Nocht热带医学研究所Drosten等报告[www.nejm.org April 10, 2003 (10.1056/NEJMoa030747v2.pdf)],SARS已于最近被确认为一种新的临床实体,并被认为由未知的感染因子造成。

  他们以细胞培养和分子技术从SARS病人的临床标本中寻找了未知的病毒。

  结果显示,在SARS病人中识别出了一种新的冠状病毒。此病毒是在细胞培养中被分离出的,并且用一种以聚合酶链反应(PCR)为基础的随机扩增方法取得了长度为300核苷酸的一段序列。遗传学特征的研究表明,此病毒与已知的冠状病毒只有较远的关系(只有50%~60%的核苷酸序列相同)。根据这段已取得的序列,他们建立了用于特异而敏感地检测这一新病毒的常规和实时PCR检测方法。研究者在SARS病人的各种标本中检测到了病毒,但在对照者中却未检测到。在痰液中发现病毒RNA浓度有高达1亿分子/毫升者。在急性期血浆中以及在恢复期后期粪便中,他们也检测到了极低浓度的病毒RNA。当以分离出此病毒的Vero细胞(含有此病毒)检测时发现,受感染的病人显示了血清转换。

  研究者称,上述新的冠状病毒可能在引起SARS中起某种作用。  

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