T-SPOT.TB 是什么？

T-SPOT.TB：结核感染特异性 T 细胞检测，完整名字为 T-SPOT.TB assay，属于 IGRAs(γ 干扰素释放试验)的一种。

* T-SPOT.TB 是完整正确称呼，是 2002-2003 年牛津大学 Lalvani 教授带领的课题组发明这个检测时定下来的名称，那时正值我院感染科刘晓清教授在那里为访问学者。「.TB」在任何时候都不能省略，未来可能还会出现 T-SPOT.CMV、T-SPOT.EBV……

T：T 细胞

SPOT：ELISPOT(酶联免疫斑点技术)是一种从单细胞水平检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术。原理是用抗体捕获培养细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。

TB：结核分枝杆菌

T-SPOT.TB 的原理是什么？

T-SPOT.TB应用 ELISPOT(酶联免疫斑点技术)检测经结核特异性抗原ESAT-6(抗原A)、CFP-10(抗原B)肽段库刺激后外周血单个核细胞IFN-γ的分泌，并经一系列反应后以斑点显示。

A、B 两种抗原的编码基因位于结核分枝杆菌RD1区，该区域在卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌中缺失，因此可以避免交叉反应，提高特异性。因此T-SPOT.TB检测的是针对结核抗原的特异性细胞免疫反应。

当患者体内出现针对结核抗原的特异性淋巴细胞时，提示该患者存在结核感染。结核感染包括潜伏结核感染和活动性结核。

(潜伏结核感染指体内存在结核分枝杆菌，但无临床症状且影像学无异常表现。此后少部分人可能发展为活动性结核。)

T-SPOT.TB 结果怎么看?

本院T-SPOT.TB检测过程：收集1*10^6外周血单个核细胞(PBMC)，平均分为4份，每份细胞数为2.5*10^5 PBMC，分别加入空白对照、抗原A、抗原B、阳性对照孔中。然后使用ELISPOT 法，并分别记录每个孔中斑点形成细胞数目(SFCs)。

* 表述 T-SPOT.TB 结果时必须带分母(也就是俗称的「单位」，就如我们的血常规中的 WBC， Hb 等后面的分母「单位」，大家看报告时是不可以省略的啊!)

存在下面几种情况：

①阳性结果（Reactive）

当空白对照≤ 5 SFCs/2.5*10^5 PBMC时，只要(A-空白)或者(B-空白)≥ 6 SFCs/2.5*10^5 PBMC考虑为阳性，存在结核感染。

当空白对照≥ 6 SFCs/2.5*10^5 PBMC时，要求A或B孔细胞数大于空白两倍才考虑阳性。

②阴性结果（Non-reactive）

当(A-空白)且(B-空白)< 6 SFCs/2.5*10^5 PBMC且阳性对照≥ 20 SFCs/2.5*10^5 PBMC时，考虑为阴性结果。

③不确定结果（Indeterminate）

当(A-空白)且(B-空白)均< 6 SFCs/2.5*10^5 PBMC且阳性对照< 20 SFCs/2.5*10^5 PBMC时，考虑为不确定结果，无法判断是否存在结核感染，建议重新送检。

④技术误差

当空白对照≥ 10 SFCs/2.5*10^5 PBMC时，考虑技术误差，无法判断是否存在结核感染，建议重新送检。

由于每孔细胞数为2.5*10^5 PBMC，而我院化验单回报结果单位会换算成10^6 PBMC，数值即为A、B 实验孔出现斑点形成细胞数目(SFCs)减去空白对照后乘以 4，因此化验单上界值为 24 SFCs/10^6 PBMC。因此，在回报的化验结果中，只要A或者B值≥ 24 SFCs/10^6 PBMC则考虑存在结核感染。

需要注意，T-SPOT.TB结果只能作为是否存在结核感染的参考，无法鉴别诊断潜伏感染和活动性结核病。除病原学确诊外，结核病的临床诊断需要结合临床表现、实验室检查、影像学结果、诊断性抗结核疗效等进行综合判断。

综上所述：

一句话：只要 A 或者 B 值 ≥ 24SFCs/10^6 PBMC 考虑存在结核感染，但阴性不能除外结核感染。

T-SPOT.TB 的阴性结果和阳性结果

①阳性结果

提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应 T 细胞，患者存在结核感染(在病原学确诊的活动性结核病患者中，T-SPOT.TB 的敏感性 90%，特异性 95%;在卡介苗广泛接种人群或发展中国家敏感性 88%、特异性 59%)。在我国 T-SPOT.TB 用于协助诊断活动性结核病时，假阳性率较高。

T-SPOT.TB 阳性结果不能作为单独或是决定性的诊断结核病的依据。

虽然 ESAT-6 和 CFP-10 在所有的卡介苗菌株以及绝大多数环境分枝杆菌中缺失，但 T-SPOT.TB 的阳性结果有可能是其他分支杆菌的感染引起的，如堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌。(注：这些分枝杆菌可致 HIV 患者机会感染)

HIV 感染者并发结核的筛查：T-SPOT.TB 受 CD4 细胞计数水平的影响比 QFT-GIT(用于检测 IFN-v 值)小，可以减少 HIV 感染后细胞免疫功能受损而导致的假阴性结果。

结核菌素试验 TST 也许会造成 T-SPOT.TB 假阳性结果，因此需同时检测T-SPOT.TB 和 TST 时，T-SPOT.TB 的血样最好在 TST 实验前或者实验后 3 天内采取。

②阴性结果

提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应 T 细胞。如出现以下情况，阴性结果不能排除结核杆菌感染的可能：

因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的;

少数免疫系统功能不全的情况，如 HIV 感染者、肿瘤患者、儿童等;

以及其它免疫学、实验非正常操作的差异。

T-SPOT.TB 是否能鉴别活动性和潜伏性结核？

不能，但有提示意义！

研究证实，活动性结核病患者与潜伏性结核感染者进行T-SPOT.TB检测，前者的斑点数显著高于后者(P<0.001)，但两者之间重叠区域很大，潜伏性结核感染的斑点数也有可能高于活动性结核病。因此T-SPOT.TB难以区分活动性结核病和潜伏性结核感染。

T-SPOT.TB的斑点数虽然并不精确地与结核活动程度成正相关，但仍然存在着结核活动程度越高斑点数越多的趋势，可以给临床医生以参考。

浆膜腔积液的T-SPOT.TB 结果有什么意义？

AB 之和大于 56 SFCs/10^6 PBMC，浆膜腔积液与血 T-SPOT.TB 斑点数之比大于 1 时，提示结核性浆膜炎可能。

与外周血检测相比，浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎更有价值。但目前没有统一的正常界值，协和医院的研究结果是：