中东呼吸综合征冠状病毒半巢式PCR检测方法的建立
作者：杨俊岭 整理 来源： 日期：2016-03-23
导读
近期，军事医学科学院军事兽医研究所研究人员发表论文，旨在建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）。研究指出，建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性，为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。该文发表在2015年第01期《中国病原生物学杂志》上。 根据MERS-CoVN蛋白基因设计并合成特异性内
近期，军事医学科学院军事兽医研究所研究人员发表论文，旨在建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）。研究指出，建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性，为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。该文发表在2015年第01期《中国病原生物学杂志》上。
根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物。通过条件优化，建立MERS-CoV半巢式PCR检测体系，扩增产物测序后与目的序列进行同源比对。以10倍系列稀释重组质粒为标准品，与普通PCR反应进行比较，检测半巢式PCR方法的灵敏度。以其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因为对照，检测半巢式PCR方法的特异性。
结果显示， 使用建立的半巢式PCR方法扩增的特异片段与GenBank中发表的MERS-CoV基因序列同源性为100%；半巢式PCR检测方法的灵敏度为1.17×101拷贝，比普通一轮PCR扩增的灵敏度（1.17×105拷贝）提高了104倍；用该方法检测MERS-CoV基因为阳性，其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性。
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