慢性乙肝肝细胞内cccDNA可出现核苷（酸）类药物耐药变异
近日，第二军医大学附属长征医院感染科和山东省威海市解放军第四○四医院感染科的研究人员共同发表论文，旨在了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）核苷（酸）类药物耐药变异的情况，并比较其与松弛环状DNA（rcDNA）耐药变异的异同。研究指出，慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷（酸）类药物耐药变异，且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致。该文发表在2012 年第30卷第1期《中华传染病杂志》上。
近日，第二军医大学附属长征医院感染科和山东省威海市解放军第四○四医院感染科的研究人员共同发表论文，旨在了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）核苷（酸）类药物耐药变异的情况，并比较其与松弛环状DNA（rcDNA）耐药变异的异同。研究指出，慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷（酸）类药物耐药变异，且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致。该文发表在2012 年第30卷第1期《中华传染病杂志》上。
取40例慢性HBV感染肝移植患者的部分肝组织，采用十二烷基硫酸钠——蛋白质沉淀法结合DNA提取试剂盒分离提取肝内的HBV cccDNA和rcDNA。将抽提产物用不降解质粒的ATP依赖DNA酶酶切纯化后，用跨HBV基因组双链缺口并涵盖常见核苷类耐药位点（rt169～rt250）的引物行单轮PCR或套式PCR选择性扩增cccDNA。另用不跨双缺口的引物PCR扩增肝组织内的HBV rcDNA和患者肝移植术前的血清HBV rcDNA。用直接测序法对上述扩增产物进行基因测序并分析核苷（酸）类药物耐药位点的检出情况。
40例患者中，31例肝组织内检测到HBV cccDNA，35例肝组织检测到HBV rcDNA，21例肝移植术前血清中检测到HBV rcDNA。测序结果显示，2例肝组织内cccDNA、rcDNA和血清rcDNA均检测到rtM204Ⅰ变异；有2例患者肝内cccDNA、rcDNA分别存在rtM204Ⅰ、rtQ215H变异，而血清rcDNA未检测到相应变异；3例血清中分别存在rtM204V、rtM204V、rtV173L＋rtL180M＋rtM204V变异，而肝内cccDNA和rcDNA未检测到相应变异。
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