近期，沈阳市第六人民医院肝病科研究人员发表论文，旨在建立一种肝细胞核因子4α（HNF4α）增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型。研究指出，HNF4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型，可以体外评价临床常用抗病毒药物，为后续HBV研究提供新思路。该文发表在2016年第01期《肝脏》杂志上。 从临床获得的急性乙型肝炎患者血清中扩增并克隆HBV全长DNA；手术获得肝组织中提取总RNA，扩增并克隆HNF4α基因cDNA。BspQI/ScaI双酶切回收HBV全长DNA，HNF4α基因cDNA定向连接到真核表达载体pcDNA3.1（+）中，构建pcDNA3.1-4α表达载体。将HBV全长DNA1μg/孔，按比例共转染pcDNA3.1-4α（0，0.5μg，1μg）于HepG2细胞，96 h后检测细胞上清中的HBsAg、HBeAg和HBV DNA；以0.5μg/1μg pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA共转染HepG2细胞，加入不同浓度LAM（0，100μmol/L）和ETV（0，10μmol/L），评价建立的体外复制模型。

　　1%TAE琼脂糖凝胶电泳鉴定HBV全长DNA和HNF4αcDNA PCR产物，条带长度为3.2 kb和1.5 kb；目的片段克隆后测序鉴定正确。胶回收HBV全长DNA克隆质粒酶切目的片段，构建的pcDNA3.1-4α表达载体酶切鉴定正确后，测序鉴定。不同浓度比例的pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA转染HepG2细胞后，0μg/1μg组合：HBeAg阴性，HBsAg阴性，上清HBV DNA载量为103；0.5μg/1μg组合：HBeAg阴性，HBsAg A值从0.1升高到1.99，上清HBV DNA载量从1×10～3 IU/mL升高到4×10～4 IU/mL；1μg/1μg组合：HBeAg阴性，HBsAg A值从0.1升高到2.4，上清HBV DNA载量从1×10～3 IU/mL升高到1×10～5 IU/mL；LAM从0～100μmol/L，细胞上清HBV DNA降低了97.6%；ETV从0～10μmol/L，上清HBV DNA降低了99.0%。

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