近期，辽宁医学院苗小青等研究了重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染对人树突状细胞功能的影响，研究发现，从人脐带血中可成功分离DC;重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染DC促进其成熟,将有效提高DC的抗原提呈能力。该文章发表于2015年20期《中国全科医学》上。

该研究旨在研究转染pcDNA-HA/ΔNp73α重组质粒对树突状细胞(DC)功能的影响。

研究者们采取健康人脐带血,分离单个核细胞,置入含有白介素4(IL-4)和粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)的RPMI1640完全培养基中培养。在培养第5、7天时收获DC细胞,加入FITC-anti-CD1a、PE-anti-CD83抗体,采用流式细胞仪检测CD1a、CD83表达情况。将DC分为正常培养至成熟的DC组(空白对照组)、空载体pcDNA-HA转染的DC组(阴性对照组)、ΔNp73α重组质粒转染的DC组(实验组)。分别在转染24、48、72h后采用荧光显微镜检测转染效率;转染48h后收获并提取细胞总RNA,采用RT-PCR检测转染后各组ΔNp73αmRNA表达情况;采用Westernblotting检测转染DC的ΔNp73α蛋白表达水平;在收获的各组DC细胞中分别加入PE-anti-主要组织相容性复合体(MHC-Ⅱ)、FITC-anti-CD40、PE-anti-CD80单克隆抗体,流式细胞仪检测CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达情况;ELISA检测各组DC细胞白介素12(IL-12)分泌水平。

结果显示，CD1a和CD83在培养第7天的表达水平均高于培养第5天(t=16.62、34.75,P<0.001)。DC于第7天诱导成熟。质粒转染DC后,24h可见特异性绿色荧光蛋白表达,48h荧光最强,转染效率为38.2%,在48h后,绿色荧光的表达逐渐减少。实验组在670bp处可见阳性条带,为ΔNp73αmRNA阳性表达,而空白对照组和阴性对照组未检测到ΔNp73αmRNA的表达。在实验组中检测到ΔNp73α蛋白的表达,而正常对照组和阴性对照组中未检测到ΔNp73α蛋白的表达。各组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平比较,差异有统计学意义(F=12.68、41.18、38.95,P<0.05);其中实验组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。各组IL-12表达水平比较,差异有统计学意义(F=37.43,P<0.001);其中实验组IL-12表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。