顺铂诱导骨肉瘤细胞自噬及其与凋亡关系的体外研究
作者：华中科技大学附属协和医院骨科张志才 邵增务 杨述华 来源：自噬的下调能增强骨肉瘤细胞对化疗药物DDP的敏感性。DDP作用于骨肉瘤细胞MG63能诱导细胞发生自噬性活化和凋亡，自噬在不同的阶段发挥着不同的作用。DDP作用早期，自噬发挥保护作用。在DDP作用后期，自噬则作为另一种死亡形式出现，和凋亡一起促进细胞死亡。 日期：2012-09-23
导读
目的：研究顺铂诱导骨肉瘤细胞自噬性活化情况，并探讨自噬与凋亡的关系。
方法：应用3甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3MA）不同时间下调自噬，采用MTT比色法，测定化疗药物DDP对骨肉瘤细胞的增殖抑制率。流式细胞仪检测DDP对MG63细胞凋亡的影响。LC3II荧光染色激光共聚焦显微镜观察自噬在细胞内的分布。MDC染色及流式细胞仪定量检测DDP诱导骨肉瘤细胞自噬水平。Western-blot检测细胞内LC3II和Caspase-3的表达。
结果：（1）DDP能有效的抑制MG63细胞的增殖；3MA提前给药能提高其增殖抑制率有明显提高；3MA迟后给药其增殖抑制率比单独使用DDP略有下降；（2）3MA自身对MG63细胞的凋亡影响很小，3MA提前给药能提高细胞凋亡率；而迟后给药，凋亡率有一定的下降。（3）LC3II绿色荧光呈点状散在分布于细胞质内，并且3MA+DDP组绿色荧光强度较DDP组弱。荧光强度DDP组与其他4组均有统计学差异；3MA+DDP组和DDP+3MA组与其他3组均有统计学差异，但该两组之间无统计学差异。（4）DDP能诱导细胞内LC3II和Caspase-3蛋白表达均增加，而3MA的干预降低了LC3II的表达反而能增加Caspase-3的表达。
结论：自噬的下调能增强骨肉瘤细胞对化疗药物DDP的敏感性。DDP作用于骨肉瘤细胞MG63能诱导细胞发生自噬性活化和凋亡，自噬在不同的阶段发挥着不同的作用。DDP作用早期，自噬发挥保护作用。在DDP作用后期，自噬则作为另一种死亡形式出现，和凋亡一起促进细胞死亡。
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