内镜下细胞膜片移植术的“专属利器”
近年来，日本胃肠病学研究所大木(TakeshiOhki)等专家进行了内镜下移植组织工程细胞膜片预防ESD术后食管狭窄的研究，并评价了其安全性和有效性。然而由于操作难度高，只有经验非常丰富且技艺高超的内镜操作医师才能完成，因此这项技术仍有待细致、深入的研究，如移植细胞膜片专用的内镜设备研发等。
内镜黏膜下剥离术(ESD)治疗食管表浅肿瘤性病变越来越常见，但大面积食管ESD术后常并发食管狭窄，需要通过多次球囊扩张来防止其发生，也有报道可通过激素、食管支架等方法进行治疗。
近年来，日本胃肠病学研究所大木(TakeshiOhki)等专家进行了内镜下移植组织工程细胞膜片预防ESD术后食管狭窄的研究，并评价了其安全性和有效性。然而由于操作难度高，只有经验非常丰富且技艺高超的内镜操作医师才能完成，因此这项技术仍有待细致、深入的研究，如移植细胞膜片专用的内镜设备研发等。
■研究简介
日本近期的一项研究开发出一种新型内镜设备，可以很容易进行细胞膜片的内镜下移植，并应用猪模型进行了体内试验，评价其临床可行性及安全性。文章发表于《消化内镜》[GastrointestEndosc2015，82(1)：147]杂志7月刊。
该研究开发的新型内镜下应用设备包含细胞膜片的携载头及通气管路(图1A)。其中，细胞膜片的携载头是由3D打印机复制出并应用具有生物相容性塑料材料制成的主体结构、应用于超声内镜的天然乳胶气囊，以及聚四氟乙烯高分子导管组成。
利用外科手术缝线将气囊固定在细胞膜片的携载头主体结构两端，应用特制的连接器将聚四氟乙烯高分子导管与通气管路相连，再将细胞膜片的携载头与可通气的导管相连，插入到内镜的活检孔道内(>2.8mm)，操作者可将气囊充气及排气。
将少量水置于气囊表面形成一定张力，之后将制成的细胞膜片黏附于气囊上，抽出气囊内部气体，使细胞膜片隐藏至携载头内部(图1B)，这样可避免在食管内的传送过程中细胞膜片脱落。到达ESD创面后，将气囊再次充气，即可很容易地将细胞膜片覆盖在创面上(图1C)。
此项研究中选用的细胞膜片是应用正常人上皮角化细胞经37℃培养14天，直径约18mm，之后降低温度至20℃，30分钟后获得。
为验证此设备的体内操作性，考虑到猪模型的消化系统解剖结构与人体相似度较高，因此进行猪模型体内实验研究。共应用3只6月龄、体重16~20kg的微型母猪进行观察。首先在内镜下应用ESD手术专用钩刀在下段食管黏膜人为制造1个270°~360°范围、5cm长的创面，12个细胞膜片分别用自主研发的专用设备及常规方法移植到ESD创面，并记录每个过程的操作时间。
细胞膜片的移植过程中(图2A、2B)，通过抽掉约1.5ml气囊内气体使细胞膜片固定在携载头内侧，之后向气囊内慢慢充气约15ml，并贴近ESD创面，维持30秒，将气囊放气，细胞膜片则会牢固贴附于创面上。所有应用此自主研发设备进行的移植术均获得成功，无不良反应发生。
此外，同时进行了常规移植方法(图2C、2D)，利用活检钳夹取细胞膜片传送至ESD创面，并将其贴附于创面，之后迅速反复挤推膜片数次，需要5分钟以确认没有发生膜片脱落后退镜。
所有的实验动物在移植术后6小时处死，对其进行解剖观察，肉眼记录移植细胞膜片的成功率。为证实移植的细胞膜片已成功贴附于相应的食管组织，随后进行了细胞角蛋白-14、p63及抗整合素β4的免疫组化染色。结果显示细胞膜片牢固贴附于创面上，并保留有细胞膜片的基本构造，如细胞与细胞之间连接以及整合素的表达(图3)。
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