本实验为进一步探讨FOXO1对AQP9的表达调控,拟在人肝癌HepG2细胞中通过慢病毒载体介导建立FOXO1过表达的肝细胞模型,分析FOXO1过表达前后AQP9的表达变化情况。
目的 本实验为进一步探讨FOXO1对AQP9的表达调控,拟在人肝癌HepG2细胞中通过慢病毒载体介导建立FOXO1过表达的肝细胞模型,分析FOXO1过表达前后AQP9的表达变化情况。
结果 1.慢病毒混合质粒转染HepG2细胞后,采用实时荧光定量PCR检测FOXO1表达,结果表明空白对照组、pWPI组及pWPI-FOXO1组的FOXO1 mRNA水平分别为(1.00±0.00)、(1.12±0.04)、(3.43±0.07),pWPI-FOXO1组明显高于pWPI组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.采用Western Blot的方法检测FOXO1在HepG细胞中的蛋白水平表达,结果表明空白对照组、pWPI组及pWPI-FOXO1组的FOXO1 mRNA水平分别为(0.12±0.01)、(0.13±0.01)、(0.31±0.02),pWPI-FOXO1组明显高于pWPI组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.慢病毒转染后,实时荧光定量PCR检测AQP9在HepG2中的mRNA表达,结果表明空白对照组、pWPI组及pWPI-FOXO1组的FOXO1 mRNA水平分别为(1.00±0.00)、(0.91±0.04)、(2.57±0.11),pWPI-FOXO1组明显高于pWPI组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组、pWPI组两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。4. 慢病毒转染后,Western Blot的方法检测AQP9在HepG2中的mRNA及蛋白表达,结果表明空白对照组、pWPI组及pWPI-FOXO1组的FOXO1 mRNA水平分别为(0.29±0.02)、(0.31±0.01)、(0.55±0.02),pWPI-FOXO1组明显高于pWPI组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组、pWPI组两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
结论 1.成功构建了含有FOXO1编码序列的pWPI-FOXO1慢病毒载体。2.慢病毒载体pWPI-FOXO1感染HepG2细胞后,显著增强了FOXO1在HepG2细胞中的表达,明显高于空白对照组、pWPI组。3.慢病毒载体介导的过表达FOXO1能够上调人肝癌细胞HepG2中AQP9的表达,为后续荧光素酶分析及ChIP实验探讨其具体的可能机制提供了基础。
(摘自2012中国消化系疾病学术大会论文集)
2012CCDD专题链接:http://zt.cmt.com.cn/zt/2012CCDD/index.html
●阅读更多消化肝病科内容请点击:http://gi.cmt.com.cn/
copyright© 版权所有,未经许可不得复制、转载或镜像
京ICP证120392号 京公网安备110105007198 京ICP备10215607号-1 (京)网药械信息备字(2022)第00160号