敲除多聚磷酸激酶后幽门螺旋杆菌合成多聚磷酸盐能力显著下降
近日，中国人民解放军第四军医大学西京医院和中国人民解放军第四军医大学唐都医院的研究人员共同发表论文，旨在研究敲除多聚磷酸激酶（polyphosphate kinase，PPK）基因后对幽门螺旋杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）逃避巨噬细胞免疫清除的影响。研究指出，PPK是H.pylori合成多聚磷酸盐的关键酶。敲除该基因后，H.pylori合成多聚磷酸盐的能力显著下降，其逃避巨噬细胞清除的能力明显减弱。该文发表在2012年第1期《世界华人消化杂志》上。
近日，中国人民解放军第四军医大学西京医院和中国人民解放军第四军医大学唐都医院的研究人员共同发表论文，旨在研究敲除多聚磷酸激酶（polyphosphate kinase，PPK）基因后对幽门螺旋杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）逃避巨噬细胞免疫清除的影响。研究指出，PPK是H.pylori合成多聚磷酸盐的关键酶。敲除该基因后，H.pylori合成多聚磷酸盐的能力显著下降，其逃避巨噬细胞清除的能力明显减弱。该文发表在2012年第1期《世界华人消化杂志》上。
通过同源重组的原理构建H.pylori PPK敲除菌株。提取PPK敲除菌株体内多聚磷酸盐，转化为ATP进行定量，并与野生型菌株内多聚磷酸盐水平进行比较。将PPK敲除菌株及野生型菌株分别与小鼠巨噬细胞系RAW264.7共同培养，比较存活的H.pylori数量。
结果研究人员成功构建敲除PPK的H.pylori菌种。Western blot显示该菌无PPK蛋白表达。对敲除PPK的H.pylori菌株中的多聚磷酸盐定量结果显示，其内PP含量为0.46±0.25nmol Pi/mg Protein，显著低于G27野生菌种（175.33±21.22nmol Pi/mg Protein，P＜0.01）。将该菌株与小鼠巨噬细胞系RAW264.7共同培养，2h时间点，G27及G27ΔPPK菌种在巨噬细胞内的存活无显著差异；而在24h时间点，G27ΔPPK菌种在巨噬细胞内的存活率显著低于野生型G27菌种，巨噬细胞内的BacLightkit染色结果显示，G27ΔPPK菌种在巨噬细胞内获得染色的活菌显著低于野生型G27菌种。
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