近期，昆明医科大学第一附属医院消化内科研究人员发表论文，旨在通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰肠上皮细胞热休克转录因子2（heat shock transcription factor 2，HSF2）表达，研究不同HSF2水平对肠上皮细胞凋亡和迁移的影响。研究指出，细胞发生凋亡时，HSF2可能对肠上皮细胞起保护作用，提示HSF2可能通过调控细胞周期来实现对细胞增殖的影响，但也可能还有其他途径；HSF2可能在凋亡损伤时对肠上皮细胞起修复作用。该文发表在2015年第24期《世界华人消化杂志》上。

　　（1）选取HT-29（人结肠癌细胞株）作为研究材料，丁酸钠（设置不同时间点/浓度）诱导细胞凋亡，MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡、周期.按实验结果选取最佳丁酸钠浓度及时间位点；（2）慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰结肠上皮细胞HSF2表达；用倒置荧光显微镜、Western blot法检测目的基因在细胞中的转染效率；（3）细胞迁移实验（划痕法/Transwell小室）检测过表达和干扰HSF2后细胞迁移能力的改变；（4）经过表达和干扰HSF2后的细胞，给予丁酸钠诱导凋亡，MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期。

　　（1）MTT实验结果显示：阴性对照组（NC组）的HT-29细胞增殖活性在实验观察期间（0-96 h）不断升高，48 h后，实验组的细胞对4个丁酸钠浓度组均表现出明显的生长抑制，相对于NC组之间差异具有统计学意义（P<0.01），故丁酸钠对HT-29细胞的生长抑制作用呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示：NC组有少量凋亡，总凋亡率为0.548%±0.113%，而实验组经4个不同浓度丁酸钠处理48 h后，总凋亡率分别为51.588%±5.110%、77.732%±2.746%、90.115%±1.438%、94.247%±1.243%，与NC组之间差异具有统计学意义（P<0.01）.而当丁酸钠浓度>2.5 mmol/L，凋亡率较1.25 mmol/L明显上升.细胞周期检测结果显示：与NC相比，1.25 mmol/L丁酸钠处理HT-29细胞48 h，G0/G1期HT-29细胞未显示出明显差异（P=1.00>0.05），即无明显细胞周期阻滞；而2.5、5.0、10 mmol/L以上浓度在各观察点均出现明显的细胞周期阻滞现象，呈明显的G1/G0期阻滞（P<0.01）；（2）慢病毒载体转染效果检测：通过倒置荧光显微镜（×100）观察可发现，各组HT-29细胞经慢病毒载体转染后均有GFP表达，转染率达80%以上.用Western blot法检测结果显示：慢病毒构建载体能够在细胞中高效、稳定地过表达和干扰目的基因；（3）MTT法检测转染过表达和si RNA的HSF2细胞在丁酸钠诱导凋亡环境下活性变化，结果显示：过表达组细胞活性高于过表达对照组（P<0.05），干扰组的细胞活性低于干扰对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；（4）细胞迁移实验发现：过表达组的细胞迁移能力较NC组明显增加，而干扰组则明显降低（P<0.05）；（5）过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞周期的影响：NC组以及使用慢病毒载体处理的5组之间，各时间点细胞周期分布差异均无统计学意义（P>0.05）；（6）过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞凋亡率的变化：过表达组总凋亡率低于过表达对照组（P<0.05）；干扰组总凋亡率高于干扰对照组（P<0.05）。

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