人正常垂体组织全长cDNA文库的构建及初步鉴定
作者：张琪 整理 来源： 日期：2012-10-03
导读
日前，天津市环湖医院和天津市神经外科研究所的研究人员共同发表论文，旨在应用SMART技术构建人正常垂体组织的全长cDNA文库。研究指出，此法构建的人正常垂体组织全长cDNA文库符合建库要求，可作为进一步研究与人垂体疾病相关基因的可靠材料。该文发表在2010年第 12期《中华老年心脑血管病杂志》上。
日前，天津市环湖医院和天津市神经外科研究所的研究人员共同发表论文，旨在应用SMART技术构建人正常垂体组织的全长cDNA文库。研究指出，此法构建的人正常垂体组织全长cDNA文库符合建库要求，可作为进一步研究与人垂体疾病相关基因的可靠材料。该文发表在2010年第 12期《中华老年心脑血管病杂志》上。
用TRIzol试剂提取组织总RNA，利用逆转录酶的末端转移酶活性，预先加入SMART引物，在CDS Ⅲ/3′ PCR引物的引导下合成cDNA第一链，LD-PCR扩增得到全长双链cDNA，经SfiI酶切及cDNA分级分离后，克隆入改造的pBluescriptⅡ SK载体，得到原始文库。将质粒转化入宿主菌DH-5α,以初步鉴定文库的质量。
文库的总库容为1×106克隆，重组率93.45%，插入片段平均长度＞1000 bp，cDNA的完整性比率为44.4％。
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