外来体介导的肝脏纤维化形成信号的控制
通过micro-RNA214的细胞间转移来调节星状细胞的结缔组织生长因子（CTGF）表达：外来体介导的肝脏纤维化形成信号的控制。
背景：星状细胞（HSC）激活与结缔组织生长因子（CTGF）产生增加有关，而CTGF是促进胶原产生的TGF-β的下游产物。近来我们发现microRNA 214（miR-214）通过与CTGF 3’端非转录区（UTR）结合来调节HSC的CTGF表达。这里我们展示HSC产生的纳米级外来体，并可作为HSC间功能性miR-214导出和运输的渠道。
方法：通过差速离心法从小鼠原代HSC的条件培养基中分离出外来体，并根据CD9蛋白质印迹、动态光散射、Zeta点位和电子显微镜来鉴定。通过RT-PCR检测细胞的或核外的miR-214。通过应用GW4869预处理的供体HSC来确定外来体。GW4869是中性鞘磷脂酶的抑制剂，而神经酰胺是中性鞘磷脂酶生成所必需的，外来体的产生依赖于神经酰胺的生物合成。在Fire-Ctx感受器显示的带菌体（由野生型CTGF UTR或缺乏miR-214结合位点的突变型CTGF UTR所控制）转染细胞后，应用生活力或荧光酶显示装置来确定运输至受体HSC的功能性miR-214。
结果：HSC外来体是一种具有双质膜的囊泡体，直径80-150nm，带有负电荷（-26mV），且标志物CD9阳性。外来体中出现MiR-214，其水平通过带有Pre-mir-214的 HSC转染是增加的。在GW4869预处理的细胞中，外来体的MiR-214水平降低，而不是细胞溶解产物。在受体细胞中，从HSC供体细胞来源的额外外来体调节野生型CTGF UTR Fire-Ctx感受器报告基因的活性，并与供体细胞的外来体MiR-214相称。miR-214转染供体HSC与CTGF UTR Fire-Ctx转染受体HSC共培养显示野生型CTGF UTR活性受到miR-214和GW4869依赖性调节，而非突变型CTGF UTR。通过与新鲜分离的供体HSC（内源性miR-214水平较高）和高度激活供体HSC（内源性miR-214水平较低）共培养，发现激活的受体HSC 的CTGF UTR活性在GW4869依赖性模式中，会被更大地抑制。在人LX-2 HSC细胞系中获得相似的结果。
结论：MiR-214可以通过外来体从HSC导出细胞外，因此，它可以被运输至邻近细胞中；然后调节它的目标UTR。这是第一次描述外来体依赖的miRs在邻近HSC间转移。这表明在肝脏纤维化形成信号的调节中，存在一种新的细胞间联系机制。
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