内分泌

含人Apelin-R重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP的构建

作者:陈小姣 整理 来源:金宝搏网站登录技巧 日期:2013-02-03
导读

           日前,西安交通大学医学院第一附属医院内分泌科和西安市北方医院心血管内科的研究人员共同发表论文,旨在构建含有人Apelin受体(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭载体,为188bet在线平台网址 相关基因Apelin的体内研究提供新方法。此研究成功构建了真核表达载体pDC316-apelinR-EGFP,得到了表达绿色荧光蛋白的Apelin-R腺病毒,该病毒有望用于188bet在线平台网址 的体内研究实验。该文章发表在2012年06卷16期的《中华临床医师杂志》上。

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  PCR方法分别扩增Apelin-R基因,测序正确后与载体pDC316-EGFP连接,构建重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP;脂质体法与腺病毒骨架载体共转染HEK293细胞进行重组腺病毒包装,稀释法测定腺病毒滴度。RT-PCR和Western blot方法检测Apelin-R的表达。

  限制性核酸内切酶鉴定及测序结果均证明Apelin-R基因成功扩增并克隆到重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP。在HEK293中成功包装出含Apelin-R的腺病毒Ad-apelinR-EGFP,病毒滴度为3.1×109 TCID50/ml,感染Ad-apelinR-EGFP的HEK293E细胞中可检测到Apelin-R的mRNA和蛋白表达。

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