人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达
日前，泰安市中心医院血液科的孙兆刚、付鹏和刘爱华等研究人员共同发表论文，旨在构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能，以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。研究指出成功构建MEF2C慢病毒表达系统，为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。该文章发表在2012年20期的《中华临床医师杂志》上。
日前，泰安市中心医院血液科的孙兆刚、付鹏和刘爱华等研究人员共同发表论文，旨在构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能，以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。研究指出成功构建MEF2C慢病毒表达系统，为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。该文章发表在2012年20期的《中华临床医师杂志》上。
以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列，通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接，将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP，构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体，转化感受态细菌，筛选阳性克隆，与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T，进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293T细胞，荧光显微镜下观察感染效率，PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况。
成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP，三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒；浓缩假病毒后测定其滴度为2×109TU/ml；以复感染系数MOI为5感染293T细胞，感染效率在70%以上。PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2CmRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(t=11.93，P=0.000)。
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