近期,解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所研究人员发表论文,旨在量化AIF基因在细胞能量代谢中的功能特性,探讨该基因相关听神经病的分子致病机制。研究指出,通过CRISPR-Cas9技术的应用,本研究快速实现了AIF蛋白表达缺失细胞系和野生型细胞系在氧化呼吸方面的差异比较,间接量化了该基因缺失所导致的能量损失,能量供应障碍可能是听神经病的致病机制之一。该文发表在2015
近期,解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所研究人员发表论文,旨在量化AIF基因在细胞能量代谢中的功能特性,探讨该基因相关听神经病的分子致病机制。研究指出,通过CRISPR-Cas9技术的应用,本研究快速实现了AIF蛋白表达缺失细胞系和野生型细胞系在氧化呼吸方面的差异比较,间接量化了该基因缺失所导致的能量损失,能量供应障碍可能是听神经病的致病机制之一。该文发表在2015年第01期《中华耳科学杂志》上。
选择第三代基因编辑工具CRISPR-Cas9技术结合阳离子脂质体转染技术,快速实现对HELA细胞的AIF基因进行敲除,并通过Western blot进行蛋白表达分析,Sanger测序进行基因型的分析,然后利用Oxygraph-2K对多个AIF基因敲除细胞系以及野生型细胞系进行氧化供能的检测,最后采用Graph Pad prism5.00进行数据分析。
通过该方法获得了多株AIF基因敲除细胞系,并发现野生型细胞系耗氧功能明显强于AIF基因敲除细胞系。
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