A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达
近期，哈尔滨医科大学附属第一医院眼科研究人员发表论文，旨在构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系，为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。研究指出，成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体，为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。该文发表在2015年第06期《眼科新进展》杂志上。 应用重叠延伸PCR法定点诱变，
近期，哈尔滨医科大学附属第一医院眼科研究人员发表论文，旨在构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系，为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。研究指出，成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体，为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。该文发表在2015年第06期《眼科新进展》杂志上。
应用重叠延伸PCR法定点诱变，构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体，以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮（human corneal epithelium，HCE）细胞，Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达。
重组质粒总长约7.5 kb，由HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒。测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中，突变载体的第1685位碱基由C替换为A，使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变。野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后，TGFBI蛋白有效表达。
相关链接：http://med.wanfangdata.com.cn/Journal/ykxjz.aspx
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