人前脑啡肽基因修饰人胚胎肾细胞的构建
作者：耿一博 整理 来源：金宝搏网站登录技巧
日期：2012-11-04
导读
山西医科大学第一临床医学院麻醉科白凤、杨保仲、薛朝霞等共同发表论文，旨在构建人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾细胞(HEK293细胞)。该研究成功构建了hPPE基因修饰的HEK293细胞,使hPPE基因可在HEK293细胞中稳定表达。该文章发表在2012年第32卷第6期《中华麻醉学杂志》上。
山西医科大学第一临床医学院麻醉科白凤、杨保仲、薛朝霞等共同发表论文，旨在构建人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾细胞(HEK293细胞)。该研究成功构建了hPPE基因修饰的HEK293细胞,使hPPE基因可在HEK293细胞中稳定表达。该文章发表在2012年第32卷第6期《中华麻醉学杂志》上。
重组质粒pcDNA3.1(+)/hPPE经限制性内切酶HindⅢ和NotⅠ进行双酶切获得hPPE基因，运用基因重组技术将hPPE基因与表达载体同源重组，转染293T细胞进行慢病毒包装、扩增、纯化，测定病毒滴度，再将重组的慢病毒载体转染HEK293细胞。用Western blot法检测hPPE基因在HEK293细胞中的表达。
结果显示，重组慢病毒载体阳性克隆测序结果和基因库的hPPE基因序列完全一致。含有hPPE基因的慢病毒载体，滴度为2.07×108TU/ml。转染慢病毒载体后的HEK293细胞，在荧光显微镜下未见到GFP荧光。转染Ubc-GFP-L.V.空病毒载体的HEK293细胞，可见到较强的荧光。Western blot法检测到经慢病毒载体转染后的HEK293细胞中hPPE基因表达呈阳性。
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