shRNA抑制人RPE细胞中HIF-1α表达下调后IGF-1对VEGF表达的影响
日前，广西壮族自治区人民医院眼科吕明良、李敏共同发表文章，旨在探讨利用小发卡环核糖核酸( shRNA)使人RPE细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因沉默后，IGF-1对VEGF表达的影响。研究表明，IGF-1可通过促进人RPE细胞中HIF-1α蛋白的累积诱导VEGF的表达，是导致PVD重要的细胞因子之一。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷第4期上。
日前，广西壮族自治区人民医院眼科吕明良、李敏共同发表文章，旨在探讨利用小发卡环核糖核酸( shRNA)使人RPE细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因沉默后，IGF-1对VEGF表达的影响。研究表明，IGF-1可通过促进人RPE细胞中HIF-1α蛋白的累积诱导VEGF的表达，是导致PVD重要的细胞因子之一。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷第4期上。
该研究收集健康男性供体眼球4只，分离、收集、培养RPE细胞，用SABC法行抗人角蛋白免疫细胞化学染色进行鉴定。用体外转录法合成针对HIF-1α mRNA序列靶点的shRNA，对3～5代RPE细胞的HIF-1α进行干扰后再经50 μg/L IGF-1处理24 h，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF mRNA的表达，采用Western blot法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF蛋白的水平。
结果显示，分离培养的细胞呈扁平不规则多角形，97％的细胞对人角蛋白呈阳性反应。50 μg/L IGF-1作用后，人RPE细胞HIF-1α mRNA表达量(1.49±0.18)与0 μg/L IGF-1组(1.46±0.17)比较差异无统计学意义(t=0.335，P=0.743)，而HIF-1α蛋白表达量(1049.86±172.54 vs 0.00±0.00)、VEGF mRNA(0.95±0.15 vs 0.35±0.07)及VEGF蛋白(391.98±56.77 vs 214.36±37.15)表达量均明显增高，差异均有统计学意义(t=16.098、9.935、6.928，P＜0.05)。shRNA干扰HIF-1α mRNA表达后，RNAi转染组HIF-1α、VEGF mRNA及其蛋白水平较RNAi空白对照组及RNAi-C转染组明显下降，3个组间各指标的总体比较差异均有统计学意义(F=68.679、89.904、21.770、6.205，P＜0.05)。
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