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人胚胎视网膜色素上皮细胞在传代中的衰老及其机制

作者：董静文整理来源：金宝搏网站登录技巧日期：2012-10-26

导读

日前，青岛大学医学院附属市立医院眼科赵颖、牛膺筠共同发表文章，旨在研究人胚胎RPE细胞在传代过程中的衰老并探讨其机制。研究表明，成功制作了RPE细胞随年龄而逐渐衰老的模型，提示衰老细胞线粒体膜电位降低，线粒体功能受损可能是RPE细胞衰老的机制之一。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012 年第30卷第1期上。

关键字：视网膜/色素上皮 | 细胞衰老 | 细胞周期 | 线粒体 | 膜电位

　　该研究收集胎龄16 ～ 28周的人胎儿眼球6个，对人胚胎RPE细胞进行分离、培养和传代以制作RPE细胞复制性衰老模型，选择3～12代的RPE细胞用于实验。对培养和传代的RPE细胞用免疫组织化学法以人角蛋白对细胞进行鉴定。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各代细胞的增生活力，以RPE细胞的吸光度(A490)表示。采用流式细胞仪检测传代细胞周期和细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化。

　　结果显示，培养和传代的细胞呈六角形，人角蛋白检测呈棕色，第3代以后的细胞色素消失，3～6代的细胞形态正常，生长活跃，之后生长能力和增生活力下降。培养第3 ～12代RPE细胞随着传代的增加，处于G0/G1期的细胞百分比逐渐增加，差异有统计学意义(F=180.430，P=0.000)，由第3代细胞的68.40％增加到第12代细胞的87.33％，细胞生长趋于停滞。各代间处于G0/G1期细胞的百分比比较，第6代细胞明显高于第3代，第9代明显高于第6代，第12代则明显高于第9代，差异均有统计学意义(t=4.002，P＜0.05；t=12.885，P＜0.01；t=16.387，P＜0.01)。MTT法对RPE细胞活力的检测结果表明，随着传代次数的增多，反映RPE细胞活力的A490值逐渐下降，总体比较差异有统计学意义(F=38.770，P=0.000)，第9代、第12代RPE细胞的A490值分别明显低于第6代和第9代，差异均有统计学意义(t=5.991、11.983，P＜0.01)。同时，3～12代PRE细胞随着传代的增加，罗丹明123染色荧光强度逐渐降低，差异有统计学意义(F=121.680，P=0.000)，第6、9、12代细胞的平均荧光强度分别低于第3、6、9代，差异均有统计学意义(t=6.918、7.620、11.207，P＜0.01)。