人视网膜胶质细胞的原代培养与鉴定方法
日前，中山大学中山眼科中心眼，科学国家重点实验室林少芬、毛羽翔、李斌等共同发表文章，旨在建立快速、收获量大且纯度高的视网膜胶质细胞的培养方法，对目标细胞的抗原表达特点进行分析。研究表明，应用胰蛋白酶、胶原蛋白酶消化法以及利用10％胎牛血清的人内皮细胞培养基，添加生长因子和肝素钠，并用FN包被培养皿进行体外培养可达到快速、大量分离和纯化人视网膜胶质细胞的目的，鉴定结果提示培养的目标细胞为人视网膜胶质细胞，其形态与以往报道的有所不同，具体特点尚需进一步研究。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012
日前，中山大学中山眼科中心眼，科学国家重点实验室林少芬、毛羽翔、李斌等共同发表文章，旨在建立快速、收获量大且纯度高的视网膜胶质细胞的培养方法，对目标细胞的抗原表达特点进行分析。研究表明，应用胰蛋白酶、胶原蛋白酶消化法以及利用10％胎牛血清的人内皮细胞培养基，添加生长因子和肝素钠，并用FN包被培养皿进行体外培养可达到快速、大量分离和纯化人视网膜胶质细胞的目的，鉴定结果提示培养的目标细胞为人视网膜胶质细胞，其形态与以往报道的有所不同，具体特点尚需进一步研究。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012 年第30卷第1期上。
该研究取正常人角膜移植供体眼球分离视网膜组织，采用质量分数2％胰蛋白酶和质量分数0.133％胶原酶Ⅵ用二步法消化获取人视网膜胶质细胞，用含质量分数10％胎牛血清的人内皮细胞培养液，其中添加内皮细胞生长因子(β-ECGF)和肝素钠，对分离的细胞进行体外培养，培养皿用纤维黏连蛋白(FN)包被以促进人视网膜胶质细胞贴壁。观察收获的目标细胞的形态特征，采用活体显微镜下形态学观察、常规组织学观察法观察目标细胞的生长，同时采用免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(Vimentin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100、CD34、Ⅷ因子在细胞中的表达以鉴定目标细胞。
结果显示，应用胰蛋白酶、胶原酶二步消化法可成功获取人视网膜胶质细胞，原代培养的细胞72 h贴壁，第9～10天细胞达到融合状态呈花瓣状；常规组织学观察显示细胞核呈鲜亮蓝色，细胞质(盘膜)呈淡红色，培养细胞GFAP、Vimentin呈强阳性表达，NSE、S100、CD34、Ⅷ因子相关抗原表达呈阴性反应。
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