人MicroRNA-335阳性对照质粒真核表达载体的构建及意义
作者：杨艳辉 整理 来源： 日期：2015-07-17
导读
近期，广西壮族自治区人民医院儿科研究人员发表论文，旨在构建人MicroRNA-335（has-miR-335）阳性对照质粒表达载体。研究指出，成功构建了has-miR-335阳性对照质粒表达载体。该载体可用于确认has-miR-335实验中RNA提取、转染和基因表达检测方法是否可靠。has-miR-335双荧光素酶报告基因检测体系的建立为进一步进行has-miR-335靶基因检测及验证奠定基
近期，广西壮族自治区人民医院儿科研究人员发表论文，旨在构建人MicroRNA-335（has-miR-335）阳性对照质粒表达载体。研究指出，成功构建了has-miR-335阳性对照质粒表达载体。该载体可用于确认has-miR-335实验中RNA提取、转染和基因表达检测方法是否可靠。has-miR-335双荧光素酶报告基因检测体系的建立为进一步进行has-miR-335靶基因检测及验证奠定基础。该文发表在2015年第01期《中国临床新医学》杂志上。
根据与has-miR-335”种子区“完全匹配的序列设计并合成一对互补的寡聚核苷酸链，经过缓慢降温退火得到目的小片段。将退火产物连接入荧光素酶报告基因载体p MIR-REPORT而得到has-miR-335阳性对照重组质粒。应用Lipofectamine 2000将has-miR-335阳性对照重组质粒、p MIR-REPORT空载体，分别与Pre-miRTMmicroRNA335 Precursor共转染至293T7/17细胞，用双荧光素酶方法检测has-miR-335在真核细胞中表达水平。
获得has-miR-335阳性对照重组质粒，经测序结果正确。has-miR-335与其阳性对照结合在真核细胞中的表达下降。
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