八色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病方法的建立
日前，北京大学第一医院、北京市道培医院和北京军区总医院的研究人员共同发表论文，旨在建立八色流式细胞术(8c-FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的方法，并进行初步验证。本研究所建立的两管8c-FCM新方法检测骨髓中白血病细胞的重复性好、准确度高，可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B-ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群；和4c-FCM比较，两管8c-FCM新方法的标本用量少，检测速度快，能够有效诊断B-ALL的MRD。该文章发表在2012 年35卷
日前，北京大学第一医院、北京市道培医院和北京军区总医院的研究人员共同发表论文，旨在建立八色流式细胞术(8c-FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的方法，并进行初步验证。本研究所建立的两管8c-FCM新方法检测骨髓中白血病细胞的重复性好、准确度高，可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B-ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群；和4c-FCM比较，两管8c-FCM新方法的标本用量少，检测速度快，能够有效诊断B-ALL的MRD。该文章发表在2012 年35卷05期的《中华检验医学杂志》上。
采用CD19/侧向角散色光(SSC)、CD45/10和CD34(或cTdT)联合设门，两管八色抗体组合检测B-ALL的MRD。将B-ALL细胞株Nalm-6细胞掺入正常人骨髓细胞中，使Nalm-6细胞占有核细胞比例为10.00％、1.00％、0.10％、0.01％和0.005％，采用已建立的8c-FCM，进行回收试验和重复性试验，评价检测方法的准确度和精密度。检测抗体标记Nalm-6后保存不同时间的荧光强度变化，评价各荧光抗体的稳定性。检测并分析39份骨髓细胞免疫表型，包括对照者9例，初发或复发B-ALL患者9例，B-ALL化疗或骨髓移植(BMT)后缓解期病例21例，评价8c-FCM方法检测正常骨髓B淋巴系细胞群和B-ALL细胞的免疫表型结果，以及对B-ALL的MRD 检测结果，并探讨其与现用四色流式细胞术(4c-FCM)的可比性。
建立了以CD19、CD45、CD10为主的两管八色抗体组合检测MRD的方法；当掺入的细胞株占有核细胞比例≥0.10％时，变异系数(CV)＜2.5％，平均回收率为95.81％；当获取106个细胞，Nalm-6细胞比例10.00％ ～0.01％时，检测到的Nalm-6细胞占骨髓有核细胞比例与实测值呈线性相关(r=0.99,P＜0.05)，该法检测骨髓中Nalm-6细胞的灵敏度达到0.01％。Nalm-6细胞株标记抗体后随时间延长略有降低，但24h内平均荧光强度减低＜10％。应用该方法检测骨髓中CD19阳性的B淋巴系细胞，对照组呈现4个连续发育阶段，可分为4期：期CD45low/CD10stro/CD20 -/CD38stro/CD34+或cTdT+，Ⅱ期CD45 +/CD10+/CD20-/CD38stro/CD34+或cTdT+，Ⅲ期CD45 +/CD10 +/CD20-/CD38stro/CD34 -或cTdT-，Ⅳ期CD45stro/CD10 -/CD20 +/CD38low/CD34 -或cTdT -。初发和复发B-ALL患者骨髓中白血病细胞与对照组相比，均存在抗原表达异常；8c-FCM检测B-ALL缓解组，有5例存在MRD，主要抗原表达与4c-FCM检测结果一致，5例MRD细胞的范围为0.02％～5.42％。
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