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大鼠结膜成纤维细胞中血管内皮生长因子和受体的表达

作者：董静文整理来源：金宝搏网站登录技巧日期：2012-10-20

导读

近日，中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科和首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心的研究人员共同发表文章，旨在观察培养的大鼠结膜成纤维细胞中是否表达血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)。研究表明，大鼠结膜成纤维细胞存在VEGF及其受体的基因表达，有VEGFR-1的蛋白表达，抗VEGF类药物可能对大鼠的结膜成纤维细胞产生影响。该文发表在《中华眼科杂志》2012 年第48卷第6期上。

　　实验研究使用健康Sprague Dawley大鼠5只，分别施行麻醉处死后，剪取球结膜组织，以组织块法接种并培养成纤维细胞。通过荧光倒置显微镜观察细胞培养情况，以间接免疫荧光法检测波形蛋白、角蛋白表达水平，对所培养的成纤维细胞进行鉴定；设计VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)3种基因的RNA引物序列，以Trizol法提取成纤维细胞中mRNA，对目的片断进行逆转录PCR扩增及凝胶电泳。扩增产物进行回收及测序，同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况。利用荧光定量PCR法观察培养的成纤维细胞中3种基因的熔解曲线和扩增曲线，同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况。

　　结果显示，大鼠结膜成纤维细胞中波形蛋白表达阳性，角蛋白表达阴性。逆转录PCR扩增后分别显示VEGF164、Flt-1、Flk-1条带，测序结果符合VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)基因序列。荧光定量PCR法检测结果显示上述基因均有陡直的扩增曲线，未见杂峰，指数扩增期均在30个循环内。免疫荧光法检测VECFR-1蛋白表达阳性。