日前,天津医科大学眼科临床学院,天津市眼科医院,天津市眼科研究所,天津市眼科学与视觉科学重点实验室包秀丽、宋慧、汤欣共同发表文章,旨在研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制。研究表明,在人晶状体上皮细胞SRA01/04中,Wnt3a过表达使Wnt/β-catenin信号通路活化,诱导细胞发生上皮间充质转化,增强运动迁移能力。该文发表在《中华眼科杂志》2012 年第35卷第4期上。
日前,天津医科大学眼科临床学院,天津市眼科医院,天津市眼科研究所,天津市眼科学与视觉科学重点实验室包秀丽、宋慧、汤欣共同发表文章,旨在研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制。研究表明,在人晶状体上皮细胞SRA01/04中,Wnt3a过表达使Wnt/β-catenin信号通路活化,诱导细胞发生上皮间充质转化,增强运动迁移能力。该文发表在《中华眼科杂志》2012 年第35卷第4期上。
研究构建Wnt3a cDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞中,对照组转入pcDNA3-HA表达载体,蛋白印迹法测定验证过表达效果;蛋白印迹法及免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中β-catenin的表达和定位变化,以及细胞上皮表型标记物E-cadherin和间质表型标记物纤维连接蛋白的表达;体外划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Wnt3a过表达对SRA01/04细胞的迁移运动能力的影响。组间计量资料的比较,采用Student's t检验分析。
结果显示,通过构建人Wnt3a cDNA表达载体获得Wnt3a过表达的Wnt3 a/SRA01/04细胞及对照pcDNA3-HA/SRA01/04细胞。Wnt3a过表达促使SRA01/04细胞内的β-catenin细胞定位由胞质转入胞核;使晶状体上皮细胞发生上皮间充质转化(上皮表型E-cadherin表达降低,间质表型纤维连接蛋白表达升高)。体外划痕试验中划痕24 h后测得Wnt3 a/SRA01/04细胞的迁移距离是(0.36 ±0.02)mm,明显高于对照组(t=21.98,P<0.01);Transwell小室迁移试验中48 h后穿过聚碳酸酯膜的Wnt3 a/SRA01/04细胞数为(92.25±10.34)个,明显多于对照组(t=10.40,P <0.01),证明Wnt3 a/SRA01/04细胞的运动迁移能力大大增强。
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