悬浮培养法富集结肠癌肿瘤干细胞的研究
近期，天津医科大学研究生院研究人员发表论文，旨在采用悬浮培养法从人结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞，为进一步研究奠定基础。研究指出，悬浮培养法富集结肠癌干细胞操作简便、相对成本较低、便于掌握，培养基组成和传代次数是影响富集效果的关键。该文发表在2015年第04期《中国慢性病预防与控制》杂志上。 HT29细胞悬浮培养使用添加多种因子的无血清培养基，显微镜下观察微球规则后，胰酶消化，制备
近期，天津医科大学研究生院研究人员发表论文，旨在采用悬浮培养法从人结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞，为进一步研究奠定基础。研究指出，悬浮培养法富集结肠癌干细胞操作简便、相对成本较低、便于掌握，培养基组成和传代次数是影响富集效果的关键。该文发表在2015年第04期《中国慢性病预防与控制》杂志上。
HT29细胞悬浮培养使用添加多种因子的无血清培养基，显微镜下观察微球规则后，胰酶消化，制备单细胞悬液进行传代；用双苯酰亚胺33342荧光染料检测HT29细胞中侧群细胞的比例；采用流式细胞术检测CD133的表达；免疫印迹法（Western blotting）检测ALDH1A1的表达；克隆形成试验检测HT29微球的克隆形成能力。
HT29细胞中侧群细胞含量为3.45%±0.05%，经过维拉帕米阻断后，HT29中侧群细胞比例明显减少，差异有统计学意义（P<0.01）；具有CD133和ALDH1A1表达阳性的细胞，表明存在结肠癌干细胞亚群。HT29细胞悬浮培养24 h，单个细胞以出芽的方式分裂，72 h可见细胞微球体积逐渐增大，7 d细胞团致密微球形态规则，形成漂浮的球体。HT29细胞微球ALDH1A1蛋白表达水平（1.98±0.41）和CD133+表达（76.04%±4.73%）明显高于常规培养的HT29细胞（分别为1.09±0.32、45.38%±10.65%），差异均有统计学意义（P<0.05）；HT29细胞微球的克隆形成率（66%±6%）明显高于常规培养的HT29细胞（18%±6%），差异有统计学意义（P<0.01），表明结肠癌干细胞富集率达70%左右。
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