工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究
作者：华中科技大学附属协和医院骨科郑东 杨述华 邵增务等 来源：武汉国际骨科高峰论坛论文汇编 日期：2012-09-23
导读
通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。
目的：构建LAP( latency associated peptide in TGF-beta，LAP) 为潜伏作用，MMP（matrix metalloproteinase, MMP）酶切位点为导向作用，TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白，并转染软骨膜来源的软骨前体细胞（chondrogenic progenitor Cells，CPCs），检验其特异性的靶向治疗作用。
方法：将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中，之后将大鼠的TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性片断(mature TGF-β3 mTGF-β3)，分别插入到MMP的上游和下游，获pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组质粒。然后将其转染入软骨膜来源的CPCs，将转染后的CPCs在有MMP-1和无MMP-1的条件下进行球团培养，并分别检测胶原Ⅱ（COLⅡ），Aggrecan（Agc）和TIMP的表达。
结果：经过测序和酶切鉴定，成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒，转染CPCs后，只有MMP酶存在的条件下才能有效的促进CPCs向软骨分化和软骨基质的合成。
结论：通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。
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