新型重组TGF-β3融合蛋白靶向促进脂肪干细胞成软骨分化的实验研究
成功构建的新型融合蛋白LAP-MMP-mTGF-β3可靶向性诱导脂肪干细胞成软骨分化，具有靶向性修复软骨缺损的应用前景。
目的 应用基因工程技术构建出具有靶向治疗功能的新型TGF-β3融合蛋白LAP-MMP-mTGF-β3，并检验其诱导脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）成软骨分化的可行性与靶向特异性。
方法 首先，经基因重组定向克隆将人工合成的编码基质金属蛋白酶（MMP）切位点氨基酸的正、反义DNA序列插入真核表达载体pIRES-EGFP得到重组体pIRES-EGFP-MMP，再将用RT-PCR技术获取的TGF-β3的潜在相关肽（LAP）片段插入到pIRES-EGFP-MMP中MMP的上游，获取的TGF-β3的活性片段mTGF-β3插入到MMP的下游，构成重组质粒pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3；然后将质粒pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3转染脂肪干细胞，分转染组与未转染组进行培养，转染组又分为实验组（含MMP酶）和对照组（不含MMP酶），分别于分组培养的第7、14、21天进行光镜观察细胞的形态变化，阿利新蓝染色和二型胶原（ColⅡ）免疫组化染色检测蛋白多糖和ColⅡ的表达。
结果 重组质粒pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3经酶切和测序鉴定与预期相符；转染ADSCs 后成功表达LAP-MMP-mTGF-β3融合蛋白，分组培养结果说明，在MMP酶存在时被激活生成活性蛋白mTGF-β3，从而显著促进脂肪干细胞向软骨细胞的分化和软骨基质的表达。
结论成功构建的新型融合蛋白LAP-MMP-mTGF-β3可靶向性诱导脂肪干细胞成软骨分化，具有靶向性修复软骨缺损的应用前景。
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