低氧环境下GDF-5诱导人骨髓间充质干细胞“自组装”成软骨的研究
作者：华中科技大学附属协和医院骨科张波 杨述华等 来源：武汉国际骨科高峰论坛论文汇编 日期：2012-09-22
导读
低氧促进GDF-5诱导hMSCs向软骨分化，低氧环境下GDF-5诱导软骨分化的hMSCs “自组装”形成的工程化软骨更具有软骨表型。
目的 探索低氧环境下生长分化因子-5（GDF-5）诱导人骨髓间充质干细胞（hMSCs）“自组装”形成工程化软骨的可行性和有效性。
方法 分离培养hMSCs，流式细胞学方法鉴定。将hMSCs用含100ng/ml GDF-5软骨诱导液（conditioned medium ，CM）分别在低氧(A组)和正常氧(B组)环境下诱导培养3周，RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan表达情况。将A,B两组hMSCs消化后，按一定密度接种于2%琼脂糖包被的24孔板, 在不同氧浓度下CM继续诱导3周，免疫组化方法检测组织Ⅰ,Ⅱ胶原表达，甲苯胺蓝染色检测葡萄糖胺聚糖（GAG）表达。
结果 hMSCs呈梭形漩涡状生长，高表达CD44、CD29 ，不表达CD45分子。含GDF-5的CM诱导hMSCs 3周后，Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA表达阳性，A组Ⅱ型胶原和Aggrecan表达量较B组均明显增加（P＜0.05）。GDF-5诱导人骨髓间充质干细胞可“自组装”形成一定形状大小类软骨样组织，低氧环境下组织块Ⅱ型胶原表达增加，Ⅰ胶原表达量下降，甲苯胺蓝染色异染加深。
结论低氧促进GDF-5诱导hMSCs向软骨分化，低氧环境下GDF-5诱导软骨分化的hMSCs “自组装”形成的工程化软骨更具有软骨表型。
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